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江蘇口碑好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒原理

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-08-22

細(xì)胞增殖分析是細(xì)胞生長(zhǎng)和分化研究的關(guān)鍵,在藥物開發(fā)階段常用來評(píng)估化學(xué)藥物的毒性和對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的控制作用。經(jīng)過之后的細(xì)胞分裂階段,各個(gè)子代細(xì)胞會(huì)從母細(xì)胞中接收到大約一半的熒光染料。采用流式細(xì)胞儀對(duì)熒光強(qiáng)度進(jìn)行分析,即可測(cè)定出自標(biāo)記結(jié)合起,單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群所經(jīng)歷的傳代數(shù)目。通常根據(jù)平均DNA含量或細(xì)胞代謝參數(shù)進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè),此類分析可以報(bào)告出總細(xì)胞數(shù)目和活細(xì)胞數(shù)目,或者測(cè)定出單個(gè)細(xì)胞內(nèi)的DNA合成情況。細(xì)胞增殖染料稀釋分析主要基于細(xì)胞膜通透性,熒光團(tuán)分子、染料進(jìn)入細(xì)胞后,將會(huì)共價(jià)結(jié)合到蛋白質(zhì)上的氨基基團(tuán)上,從而使染料能夠長(zhǎng)時(shí)間停留在細(xì)胞中。上海東寰告訴您EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒哪家好?江蘇口碑好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒原理

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細(xì)胞增殖&細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖以及遺傳的基礎(chǔ),是生物體的重要生命特征。檢測(cè)細(xì)胞在培養(yǎng)基或組織中的生長(zhǎng)速率,對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)和分化研究至關(guān)重要。在藥物開發(fā)過程中也常被用于評(píng)估藥物的毒性和對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制情況。細(xì)胞增殖檢測(cè)通常是基于DNA含量或細(xì)胞代謝實(shí)現(xiàn)的,主要的研究方向?yàn)閷?duì)活細(xì)胞的代謝活性的檢測(cè)(基于WST、XTT、MTT等)及對(duì)DNA合成的檢測(cè)(基于BrdU的免疫法或EdU的點(diǎn)擊化學(xué)法),可通過體內(nèi)成像、微孔板或流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)等多種技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞示蹤。使用四唑鹽進(jìn)行代謝活性檢測(cè)通過添加四咪唑鹽到細(xì)胞中可進(jìn)行線粒體內(nèi)酶代謝活性的測(cè)定。浙江提供EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)是什么?上海東寰告訴您。

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上海東寰活細(xì)胞能將四咪唑鹽(如MTT、XTT、WST-1)還原成有色的甲瓚或甲瓚鹽(Formazan),可通過分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。CellCountingKit–8(96992)和CellProliferationReagentWST-1中的WST-8被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比?;贑CK-8(WST-8)的試劑盒能高度準(zhǔn)確地檢測(cè)細(xì)胞增殖,比MTT法及XTT法的靈敏度高5倍,能檢測(cè)更低的細(xì)胞數(shù)目。該試劑盒可適用于96孔板培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞。

傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測(cè)方法不需要?jiǎng)×业腄NA變性,只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理,能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識(shí)別位點(diǎn),操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似,而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免樣品損傷,而且無需抗原抗體反應(yīng),能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性dU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒找哪家比較安心?上海東寰不錯(cuò)。

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本試劑盒使用便捷、兼容性好。本試劑盒只需常用的多聚甲醛固定和Triton X-100穿透,就可以使疊氮化物探針有效進(jìn)入細(xì)胞并發(fā)生點(diǎn)擊反應(yīng),不會(huì)影響細(xì)胞形態(tài),不會(huì)影響基于抗體的免疫熒光和免疫組化檢測(cè),也不會(huì)影響DNA的熒光染色(如PI染色檢測(cè)細(xì)胞周期、DAPI或Hoechst染料檢測(cè)細(xì)胞核)。而BrdU法為了使大分子的BrdU抗體進(jìn)入細(xì)胞并與DNA上的BrdU結(jié)合,需要對(duì)雙鏈DNA進(jìn)行變性處理(如酸變性、熱變性或者DNase消化等),這種變性可能會(huì)影響細(xì)胞形態(tài),影響后續(xù)的免疫熒光和免疫組化檢測(cè)、DNA的熒光染色等。BrdU法和BeyoClick? EdU法檢測(cè)原理的比較參見圖2。使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒前的安全檢查。湖北咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商

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傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法需要DNA變性,抗原修復(fù),抗原抗體過夜孵育,操作步驟復(fù)雜繁瑣。并且由于BrdU抗體分子較大,嵌入DNA分子中的BrdU無法直接與BrdU抗體結(jié)合,必須先進(jìn)行DNA變性操作才能使BrdU抗原表位暴露,但變性的程度可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。如果變性不充分,會(huì)導(dǎo)致BrdU難以暴露,無法檢測(cè),而且變性過程從邊緣向中間滲透,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞核DNA的變性不均勻,邊緣模糊不清。如果變性過分,則會(huì)導(dǎo)致DNA斷裂,甚至降解,導(dǎo)致核染不均一。另外,不同抗體試劑公司的抗體質(zhì)量不一致,造成難以確保實(shí)驗(yàn)重復(fù)性,且容易產(chǎn)生假陽性結(jié)果。江蘇口碑好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒原理

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