EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價(jià)銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的DNA會(huì)被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)設(shè)備檢測(cè)到增殖的細(xì)胞。EdU檢測(cè)法中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細(xì)胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，終使細(xì)胞DNA標(biāo)記上生物素等探針。上海東寰告訴您使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的便捷性。北京正規(guī)EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒價(jià)格

    Jurkat細(xì)胞只用EdU標(biāo)記(左列)，或在標(biāo)記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列)，2小時(shí)后染色，然后通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。從流式結(jié)果圖中可以看出，EdU標(biāo)記的細(xì)胞有較高比例的綠色熒光陽(yáng)性細(xì)胞，呈現(xiàn)綠色熒光陰性(弱染色)和陽(yáng)性(強(qiáng)染色)的兩個(gè)峰，分別對(duì)應(yīng)于未增殖細(xì)胞和增殖細(xì)胞。經(jīng)過Hydroxyurea處理的細(xì)胞，綠色熒光陽(yáng)性的細(xì)胞幾乎完全消失，剩下一個(gè)綠色熒光陰性的峰。Hela細(xì)胞只用EdU標(biāo)記(左列)，或在標(biāo)記EdU0min用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)處理(右列)，2小時(shí)后染色（步驟染Hoechst，方便觀察增殖細(xì)胞比例），然后通過熒光顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。鏡下可見，*EdU標(biāo)記的細(xì)胞有一部分染上綠色熒光的增殖細(xì)胞，未增殖細(xì)胞的細(xì)胞核呈藍(lán)色單染。 湖北咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒在社會(huì)上的重要性。

快速—–無需過夜，省卻抗原抗體反應(yīng)。整個(gè)檢測(cè)過程只需 2.5 小時(shí)，縮短實(shí)驗(yàn)周期。準(zhǔn)確—–標(biāo)記率高且無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完。靈敏—–無需抗體，檢測(cè)染料為BrdU抗體的1/500，更容易擴(kuò)散，即使單個(gè)增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測(cè)。兼容—–對(duì)樣品幾乎無損傷，允許與多種抗體或熒光蛋白同時(shí)標(biāo)記，能夠同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞其他性狀特征。本試劑盒適用于培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品，也適用于組織切片，可以檢測(cè)到細(xì)胞或組織樣本中的單個(gè)增殖細(xì)胞，也可以對(duì)細(xì)胞或組織樣本總體的細(xì)胞增殖情況進(jìn)行定量分析。

EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)：EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測(cè)細(xì)胞DNA復(fù)制活性，適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面的研究，尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實(shí)驗(yàn)。與BrdU檢測(cè)方法相比，EdU檢測(cè)方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU染料只有BrdU抗體的1/500，在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等），可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更準(zhǔn)確地反映DNA復(fù)制活性。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒應(yīng)用再哪些地方？

能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng)，把熒光集團(tuán)標(biāo)記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣就可以進(jìn)行高效快速的檢測(cè)出DNA復(fù)制活性，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長(zhǎng)與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒使用時(shí)要考慮什么問題？北京哪家公司提供EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商

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細(xì)胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細(xì)胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘，以中和過量的多聚甲醛；(c)棄甘氨酸溶液，每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細(xì)胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細(xì)胞通透溶液；(e)每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；該產(chǎn)品是采用成像檢測(cè)方法對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理，固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測(cè)。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)。北京正規(guī)EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒價(jià)格