通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應，把熒光集團標記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣就可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性，廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復等方面的研究。EdU標記(a)將細胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標記培養(yǎng)基預熱，然后等體積加入到細胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因為這樣可能會影響細胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細胞2小時，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數**細胞以及粘附細胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。EdU細胞增殖檢測試劑盒的特點是什么？上海東寰告訴您。上海正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢

保存條件：4℃或-20℃保存，MTT需避光保存，一年有效；MTT配制成溶液后需-20℃避光保存；Formazan溶解液也可以室溫保存。注意事項：由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內水源的地方，以緩解蒸發(fā)。MTT溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。MTT配制成溶液后為黃色，需避光保存，長時間光照會導致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。上海正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢EdU細胞增殖檢測試劑盒的功能具體介紹。

快速—–無需過夜，省卻抗原抗體反應。整個檢測過程只需 2.5 小時，縮短實驗周期。準確—–標記率高且無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細胞核邊緣清晰完。靈敏—–無需抗體，檢測染料為BrdU抗體的1/500，更容易擴散，即使單個增殖細胞也能準確檢測。兼容—–對樣品幾乎無損傷，允許與多種抗體或熒光蛋白同時標記，能夠同時檢測細胞其他性狀特征。本試劑盒適用于培養(yǎng)的細胞或組織樣品，也適用于組織切片，可以檢測到細胞或組織樣本中的單個增殖細胞，也可以對細胞或組織樣本總體的細胞增殖情況進行定量分析。

直接測定DNA合成是細胞增殖檢測的準確方法之一，EdU細胞增殖檢測試劑盒采用另外一種胸腺嘧啶核苷酸類似物-EdU（5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷），在細胞增殖時EdU能夠插入正在復制的DNA分子中，利用EdU與染料之間的點擊化學(ClickChemistry)反應可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析，可以有效地檢測處于S期的細胞百分數。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色（BrdU）檢測方法相比(圖1)，更簡單，更快速，更準確。EdU只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內更容易擴散，不需要嚴格的樣品變性（酸解、熱解、酶解）處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。EdU分析方法反應條件比較溫和，我們提供的一系列AndyFluor?染料標記可以用于多色通道選擇，也可以用于培養(yǎng)細胞分析及組織切片分析（圖2）。EdU細胞增殖檢測試劑盒的結構如何組成？

EdU-488細胞增殖檢測試劑盒(Meilun EdU Cell Proliferation Kit with Alexa Fluor 488)，是一種利用核苷滲入法對細胞增殖情況進行快速、簡單、高靈敏檢測的試劑盒。其原理為：試劑盒中的EdU(5-ethynyl-2′ -deoxyuridine)是一種胸苷(T)類似物，EdU可以在在細胞周期的S期中替代胸苷摻入到新合成的DNA中；另一方面，EdU上的乙炔基能與疊氮化物(如熒光探針Alexa Fluor 488 Azide)通過Cu+的催化發(fā)生共價反應，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應非常迅速，被稱作點擊反應(Click reaction)(圖1)。通過點擊反應，新合成的DNA會被綠色熒光標記，然后通過檢測熒光信號實現(xiàn)細胞增殖的檢測。EdU細胞增殖檢測試劑盒的作用是什么？上海東寰告訴您。北京提供EdU細胞增殖檢測試劑盒廠家

EdU細胞增殖檢測試劑盒的運用領域有哪些？上海正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢

細胞增殖是評價細胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標。EdU(5-Ethynyl-2,-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物，其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復制的DNA分子中，EdU細胞增殖檢測試劑盒通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應，把熒光集團標記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣就可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性，廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復等方面的研究。傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復、抗原抗體過夜孵育等復雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性，只需溫和的細胞固定化和透化處理，能夠較好地保護細胞形態(tài)、DNA整體結構及細胞內抗原識別位點，操作步驟更加快速、靈敏和準確。EdU與胸腺嘧啶(T)結構非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細胞內很容易擴散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應，能在細胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復制活性。上海正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢