本試劑盒小包裝C0085S如果用于培養(yǎng)的細(xì)胞(6孔板)的檢測(cè)，可以檢測(cè)50個(gè)樣品，每個(gè)樣品的反應(yīng)體系為500μl的Click反應(yīng)液；如果用于96孔板檢測(cè)，可以檢測(cè)500個(gè)樣品，每個(gè)樣品的檢測(cè)體系為50μl的Click反應(yīng)液；如果用于12孔、24孔、48孔或384孔板樣品的檢測(cè)，分別可以檢測(cè)125、250、350和1250個(gè)樣品，每個(gè)樣品推薦的Click反應(yīng)液用量為200μl、100μl、70μl和20μl。小包裝如果用于冰凍或石蠟切片的檢測(cè)，可以檢測(cè)125-250個(gè)樣品，每個(gè)樣品的反應(yīng)體系為100-200μl的Click反應(yīng)液。大包裝C0085L可檢測(cè)樣品的數(shù)量為小包裝C0085S的4倍。上海東寰與您分享EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的重要性。福建EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒公司

EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會(huì)影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒(méi)過(guò)細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時(shí)，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長(zhǎng)狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時(shí)的孵育時(shí)間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。江西品質(zhì)好的EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的重要組成部分。

使用本試劑盒所做結(jié)果可以用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、流式細(xì)胞儀或熒光酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)，也可以用于高內(nèi)涵篩選(High-Content Screening, HCS)。對(duì)6孔板培養(yǎng)的細(xì)胞（每孔500μl的Click反應(yīng)液）、96孔板培養(yǎng)的細(xì)胞（每孔50μl的Click反應(yīng)液）、每管細(xì)胞數(shù)量為10-100萬(wàn)的流式細(xì)胞儀檢測(cè)（每管500μl的Click反應(yīng)液）以及冰凍或石蠟切片的檢測(cè)（每個(gè)樣品100-200μl的Click反應(yīng)液），不同規(guī)格的本產(chǎn)品可以提供的反應(yīng)的量詳見說(shuō)明書中的表。光譜特性：488-Azide：綠色熒光，Ex/Em=491/518nm；Hoechst 33342：藍(lán)色熒光，Ex/Em=346/460nm, bound to DNA。

傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測(cè)方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過(guò)夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測(cè)方法不需要?jiǎng)×业腄NA變性，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識(shí)別位點(diǎn)，操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無(wú)需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無(wú)需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒如何發(fā)揮重要作用？上海東寰告訴您。

羥基脲(Hydroxyurea)為DNA合成抑制劑，經(jīng)過(guò)10mM羥基脲提0min處理的細(xì)胞，綠色熒光陽(yáng)性的細(xì)胞幾乎完全消失，因此常被用作EdU實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照。配制好的Click-iT Additive Solution請(qǐng)根據(jù)每次用量適當(dāng)分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。Click-iT Additive Solution融化后有白色物質(zhì)析出為正?，F(xiàn)象，請(qǐng)上下顛倒幾次，待全部溶解后使用。溶液一旦呈現(xiàn)棕色，則說(shuō)明有效成分降解，不能再使用。皂苷促滲液可以用于全血及含紅細(xì)胞的細(xì)胞懸液，以及其他含多種細(xì)胞類型的混合細(xì)胞懸液的通透。這種促滲液可以在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)，維持白細(xì)胞的光散射特性。本試劑盒做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)可能需要更多的EdU，請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用合適稀釋液稀釋后使用。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的發(fā)展前景如何呢？品牌EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒公司

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這幾種方法盡管都不是檢測(cè)DNA合成的，但被用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDASE法(C0051、C1031)基于細(xì)胞熒光示蹤的原理能檢測(cè)到單個(gè)的增殖細(xì)胞，但由于每增殖一次熒光減弱一半，在熒光顯微鏡下較難區(qū)分熒光減弱一半的細(xì)胞，檢測(cè)靈敏度不是很高，通常*適用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)。在進(jìn)行科學(xué)研究時(shí)，上述這些基于細(xì)胞活性或CFDASE的方法可以作為EdU法的補(bǔ)充性檢測(cè)方法。EdU(5-ethynyl-2'-deoxyuridine)，中文名為5-乙炔基-2'-脫氧尿苷，是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine)類似物，EdU可以在DNA合成過(guò)程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。福建EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒公司