4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃預(yù)冷20min)。d,封閉液。e,／LPBS緩沖液。2、染色方法a,取出培養(yǎng)有細(xì)胞的蓋玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛試問固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗兩次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。e.去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過夜?？贵w以mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗(yàn)而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用濾紙吸干。(PBS配制)封片。j.免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。免疫熒光雙標(biāo)記方法免疫熒光的雙標(biāo)記是指同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當(dāng)懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些，應(yīng)注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來自家兔；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊，且盡量遠(yuǎn)離，通?？梢赃x擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下，染色時(shí)兩種一抗可以同時(shí)孵育，然后可以同時(shí)孵育兩種二抗。但當(dāng)染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強(qiáng)時(shí)，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。上海哪家EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒廠家值得信賴？品牌EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒哪家好

    按照以下的表格進(jìn)行染色反應(yīng)液的配制：染色反應(yīng)液組分500μl1ml2ml5ml1×反應(yīng)緩沖液430μl860μlmlml催化劑溶液20μl40μl80μl200μlTAMRA紅色熒光溶液μlμl5μlμl緩沖添加劑50μl100μl200μl500μl3、每孔加入100μl配置好的檢測混合液，以覆蓋細(xì)胞為宜，避光、室溫孵育30分鐘；4、棄染色反應(yīng)液，加入100μlTritonX-100細(xì)胞滲透液清洗2-3次，每次10分鐘；5、棄細(xì)胞滲透液，用PBS洗兩次，每次5分鐘。DNA染色1、將Hoechst33342用RNase-free水溶液1：1000進(jìn)行稀釋得到終濃度為5μg/ml的1×Hoechst染色液；2、每孔加入100μl1×Hoechst染色液，室溫避光孵育20-30分鐘后，棄染色液；3、每孔加入100μlPBS洗細(xì)胞兩次，去掉洗液。圖像獲取及分析建議染色完成后立即進(jìn)行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請于4°C條件下避光濕潤保存3天之內(nèi)完成拍照。若為細(xì)胞爬片或涂片，可使用抗熒光淬滅封片劑進(jìn)行封片后于4°C條件下保存及拍照檢測。湖南如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒說明書你知道EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的特點(diǎn)嗎？

EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測細(xì)胞DNA復(fù)制活性，適用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細(xì)胞標(biāo)記示蹤等方面的研究，尤其適合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實(shí)驗(yàn)。與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU與T非常相似，而EdU染料只有BrdU抗體的1/500，在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等），可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更準(zhǔn)確地反映DNA復(fù)制活性

EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒BeyoClick? EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒(DAB法)(BeyoClick? EdU Cell Proliferation Kit with DAB)，是一種基于DNA合成過程中胸腺嘧啶脫氧核苷(thymidine)類似物EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)的摻入，并通過隨后的點(diǎn)擊反應(yīng)(Click reaction)使EdU被生物素(Biotin)所標(biāo)記，然后加入的辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素(HRP-Streptavidin)與生物素結(jié)合，再然后通過DAB顯色，從而實(shí)現(xiàn)簡單、快速、高靈敏地檢測細(xì)胞增殖的試劑盒。上海哪家EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒值得信賴？

更準(zhǔn)確--無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完整；更簡單--無需抗原抗體反應(yīng)，基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測方法，簡單高效，反應(yīng)單需要幾分鐘；更靈敏--無需抗體，檢測染料單為BrdU抗體的1/500，更容易擴(kuò)散，即使單個增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測；更快速--無需過夜，省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟，完成整個檢測周期單需2.5小時(shí)；更兼容--對樣品幾乎無損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時(shí)標(biāo)記，能夠同時(shí)檢測細(xì)胞其他性狀特征。rdU需要DNA變性后才能與抗體結(jié)合，導(dǎo)致BrdU、Hoechst染色彌散，邊緣模糊不清；而EdU邊緣清晰完整，檢測更靈敏、更準(zhǔn)確EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒使用時(shí)要考慮什么問題？浙江哪家公司提供EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒評價(jià)

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傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識別位點(diǎn)，操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性品牌EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒哪家好