另一方面，EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價(jià)銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的DNA會被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測設(shè)備檢測到增殖的細(xì)胞。圖1.BeyoClick?EdU檢測法中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細(xì)胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，終使細(xì)胞DNA標(biāo)記上生物素等探針。本試劑盒反應(yīng)簡單、檢測靈敏度高。本試劑盒基于簡單高效的點(diǎn)擊反應(yīng)，無需DNA變性，只需少量的小分子疊氮化物探針即可非常有效地標(biāo)記出摻入的EdU，并且可以檢測到單個細(xì)胞的增殖情況。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒，有哪些好處值得選擇？北京EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理

本試劑盒使用便捷、兼容性好。本試劑盒只需常用的多聚甲醛固定和Triton X-100穿透，就可以使疊氮化物探針有效進(jìn)入細(xì)胞并發(fā)生點(diǎn)擊反應(yīng)，不會影響細(xì)胞形態(tài)，不會影響基于抗體的免疫熒光和免疫組化檢測，也不會影響DNA的熒光染色(如PI染色檢測細(xì)胞周期、DAPI或Hoechst染料檢測細(xì)胞核)。而BrdU法為了使大分子的BrdU抗體進(jìn)入細(xì)胞并與DNA上的BrdU結(jié)合，需要對雙鏈DNA進(jìn)行變性處理(如酸變性、熱變性或者DNase消化等)，這種變性可能會影響細(xì)胞形態(tài)，影響后續(xù)的免疫熒光和免疫組化檢測、DNA的熒光染色等。BrdU法和BeyoClick? EdU法檢測原理的比較參見圖2。福建咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒廠家EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的優(yōu)點(diǎn)體現(xiàn)在哪？

本試劑盒可以檢測到細(xì)胞或組織樣品中單個的增殖細(xì)胞，同時也可以對細(xì)胞或組織樣品總體的細(xì)胞增殖情況進(jìn)行定量檢測。本試劑盒可以檢測培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品，也可以檢測組織切片，但均需提前進(jìn)行EdU的摻入。細(xì)胞增殖能力的檢測是評估細(xì)胞活性、基因毒性和抗藥物效果等的基本方法。公認(rèn)的精確的檢測細(xì)胞增殖的方法是直接檢測細(xì)胞中DNA的合成。初使用的通過檢測DNA合成來檢測細(xì)胞增殖的方法是放射性標(biāo)記核苷摻入法，如氚標(biāo)記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)摻入法。

EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。本試劑盒可以檢測到細(xì)胞或組織樣品中單個的增殖細(xì)胞，同時也可以對細(xì)胞或組織樣品總體的細(xì)胞增殖情況進(jìn)行定量檢測。本試劑盒可以檢測培養(yǎng)的細(xì)胞或組織樣品，也可以檢測組織切片，但均需提前進(jìn)行EdU的摻入。細(xì)胞增殖能力的檢測是評估細(xì)胞活性、基因毒性和抗藥物效果等的基本方法。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒哪家好？上海東寰告訴您！

    注：1）培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2）孵育時間至少2小時，可延長至24小時后再檢測也可以。4、以1×PBS清洗細(xì)胞兩次，每次5分鐘，以除去未摻入RNA的EU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。細(xì)胞的固定和通透1、每孔加入150μl細(xì)胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；注：1)該試劑盒配備了細(xì)胞固定液，也可以使用含4%多聚甲醛的PBS來進(jìn)行細(xì)胞固定；2)如果使用其他的細(xì)胞固定劑建議用DEPC水來配置，避免RNA酶降解細(xì)胞內(nèi)的RNA。2、每孔加入150μl2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘；3、棄甘氨酸溶液，每孔加入300μlPBS洗液，室溫清洗5分鐘；4、每孔加入300μlTritonX-100細(xì)胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細(xì)胞通透溶液；5、每孔加入300μlPBS洗液，室溫清洗5分鐘；EU染色1、通過用10：1去離子水稀釋10×反應(yīng)緩沖液進(jìn)行配制1×EU反應(yīng)緩沖液；2、按照溶解200mg緩沖添加劑溶于1ml去離子水的比例稱取適量的粉末進(jìn)行溶解，即為可用的緩沖添加劑的濃度，建議現(xiàn)用現(xiàn)配；注：緩沖添加劑為白色粉末，較難準(zhǔn)確稱量，稱量范圍可稍微放寬，但是不應(yīng)超過±20%，且該粉末較易氧化，使用后請旋緊管蓋，如試劑出現(xiàn)棕黃色，則需報(bào)廢或更換。上海EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的價(jià)格是多少？湖南如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒評價(jià)

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    試劑盒以外自備試劑和儀器：●PBS●純水●1%乙酸●移液器及吸頭●有515nm波長的酶標(biāo)儀使用方法：使用注意事項(xiàng)：●接種時注意細(xì)胞懸液一定要混勻，以避免細(xì)胞沉淀下來，導(dǎo)致每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接種幾個孔就混勻一下。培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)基容易揮發(fā)，為了減少誤差，建議培養(yǎng)板的四邊每孔只加培養(yǎng)基，而不作為指標(biāo)檢測孔?！衽囵B(yǎng)時間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異?！裼盟蛞宜嵯醇?xì)胞時充滿孔后保持一會倒掉即可，也可以用排或洗板機(jī)?！馩D值在1-2之間較好。以96孔板為例：1．取出培養(yǎng)好待測的96孔板。2．在培養(yǎng)基表面小心加入50μl固定液(懸浮細(xì)胞加100μl固定液)，靜置5分鐘后放入4℃冰箱30分鐘-1小時。(貼壁細(xì)胞可棄培養(yǎng)基后加入用水3倍稀釋的固定液；懸浮細(xì)胞必須直接加入固定液，輕加在培養(yǎng)液面，靜置5分鐘后再將平板移至4℃放置1小時，可使懸浮細(xì)胞固定在培養(yǎng)孔底部)。 北京EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理