EdU細胞增殖檢測試劑盒BeyoClick?EdU細胞增殖檢測試劑盒(DAB法)(BeyoClick?EdUCellProliferationKitwithDAB)，是一種基于DNA合成過程中胸腺嘧啶脫氧核苷(thymidine)類似物EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)的摻入，并通過隨后的點擊反應(yīng)(Clickreaction)使EdU被生物素(Biotin)所標記，然后加入的辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素(HRP-Streptavidin)與生物素結(jié)合，再然后通過DAB顯色，從而實現(xiàn)簡單、快速、高靈敏地檢測細胞增殖的試劑盒。EdU細胞增殖檢測試劑盒的原理是什么？上海東寰告訴您。河南哪家公司提供EdU細胞增殖檢測試劑盒

本試劑盒使用便捷、兼容性好。本試劑盒只需常用的多聚甲醛固定和TritonX-100穿透，就可以使疊氮化物探針有效進入細胞并發(fā)生點擊反應(yīng)，不會影響細胞形態(tài)，不會影響基于抗體的免疫熒光和免疫組化檢測，也不會影響DNA的熒光染色(如PI染色檢測細胞周期、DAPI或Hoechst染料檢測細胞核)。而BrdU法為了使大分子的BrdU抗體進入細胞并與DNA上的BrdU結(jié)合，需要對雙鏈DNA進行變性處理(如酸變性、熱變性或者DNase消化等)，這種變性可能會影響細胞形態(tài)，影響后續(xù)的免疫熒光和免疫組化檢測、DNA的熒光染色等。BrdU法和BeyoClick?EdU法檢測原理的比較參見圖2。湖南品牌EdU細胞增殖檢測試劑盒供應(yīng)商上海東寰告訴您EdU細胞增殖檢測試劑盒的運用方式。

細胞增殖雖然與多種因素有關(guān)，比如細胞代謝活性、與細胞增殖相關(guān)的蛋白表達、ATP的濃度等等，但是檢測細胞增殖現(xiàn)象的直接準確的方法就是用熒光探針直接檢測遺傳物質(zhì)DNA的合成，這種方法是研究細胞增殖、信號通路、DNA修復(fù)及分化等等方向常用的方法。與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比，EdU只有BrdU抗體大小的1/500，在細胞內(nèi)更容易擴散，不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度

EdU染料只有BrdU抗體的1/500，在細胞內(nèi)很容易擴散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等），可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細胞和組織水平更準確地反映DNA復(fù)制活性。EdU細胞增殖檢測：EdU（5-Ethynyl-2’-deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo熒光染料的特異性反應(yīng)快速檢測細胞DNA復(fù)制活性，適用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復(fù)、病毒復(fù)制、細胞標記示蹤等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EdU細胞增殖檢測試劑盒給社會帶來了什么好處？

    4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃預(yù)冷20min)。d,封閉液。e,／LPBS緩沖液。2、染色方法a,取出培養(yǎng)有細胞的蓋玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛試問固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗兩次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室溫封閉30min-1h。e.去封閉液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃過夜?？贵w以mo/LPBS稀釋(理想的抗體濃度需經(jīng)試驗而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用濾紙吸干。(PBS配制)封片。j.免疫熒光顯微鏡下觀察，或于4℃避光保存。免疫熒光雙標記方法免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)分子，當懷疑某種配體與已知受體結(jié)合后可用此方法加以證明。此方法稍微復(fù)雜一些，應(yīng)注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如：A抗體為多克隆抗體，來自家兔；B抗體為單克隆抗體，來自小鼠)。其次，兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應(yīng)重疊，且盡量遠離，通常可以選擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下，染色時兩種一抗可以同時孵育，然后可以同時孵育兩種二抗。但當染色結(jié)果一種顏色非常弱，而另一種顏色比較強時，應(yīng)考慮先孵育顏色較弱的二抗。EdU細胞增殖檢測試劑盒的特點是什么？上海東寰告訴您。EdU細胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢

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保存條件：4℃或-20℃保存，MTT需避光保存，一年有效；MTT配制成溶液后需-20℃避光保存；Formazan溶解液也可以室溫保存。注意事項：由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。MTT溶劑在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。MTT配制成溶液后為黃色，需避光保存，長時間光照會導(dǎo)致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時，請勿使用。MTT溶液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。河南哪家公司提供EdU細胞增殖檢測試劑盒