EdU標記(a)將細胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液,制成2xEdU標記培養(yǎng)基;(b)提前將2xEdU標記培養(yǎng)基預熱,然后等體積加入到細胞原有培養(yǎng)基中,獲得lxEdU溶液,其中EdU的終濃度為10uM;注:1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基,因為這樣可能會影響細胞增殖的速度;2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配,用量以沒過細胞為宜;(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細胞2小時,棄培養(yǎng)基;注:1)培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài);2)大多數(shù)**細胞以及粘附細胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細胞兩次,毎次5分鐘,以除去未摻入DNA的EdU殘留EdU細胞增殖檢測試劑盒多少錢?山東正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒評價
EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物,能夠在細胞增殖時期代替T滲入正在復制的DNA分子,通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應(yīng)檢測DNA復制活性,通過檢測EdU標記便能準確地反映細胞的增殖情況。與BrdU檢測方法相比,EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500,在細胞內(nèi)很容易擴散,無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)即可有效檢測,可有效避免樣品損傷,在細胞和組織水平能更準確地反映細胞增殖等現(xiàn)象安徽咨詢EdU細胞增殖檢測試劑盒公司EdU細胞增殖檢測試劑盒常見的用途有哪些?上海東寰告訴您。
細胞增殖能力的檢測是評估細胞活性、基因毒性和抗藥物效果等的基本方法。公認的精確的檢測細胞增殖的方法是直接檢測細胞中DNA的合成。初使用的通過檢測DNA合成來檢測細胞增殖的方法是放射性標記核苷摻入法,如氚標記胸腺嘧啶脫氧核苷([3H]thymidine)摻入法。細胞活性的細胞增殖檢測方法,能檢測到細胞的總體增殖效果,但無法檢測到單個的增殖細胞。這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的,但被用于替代[3H]thymidine摻入法。上述這些基于細胞活性或CFDASE的方法可以作為EdU法的補充性檢測方法
EdU細胞增殖檢測和BrdU細胞增殖檢測的對比。小分子化合物AndyFluor?azide與EdU之間的點擊化學(ClickChemistry)反應(yīng)不需要DNA變性,就可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析,該反應(yīng)不受雙鏈DNA中堿基對的影響,因此客戶了BrdU摻入法的弊端。圖2.使用EdU細胞增殖檢測試劑盒對細胞和組織的染色效果。使用10μMEdU處理A549細胞2小時,然后分別使用AndyFluor?488azide(綠色,上圖)、AndyFluor?594azide(紅色,中間圖)檢測細胞增殖活性,使用DAPI進行復染(藍色)。腹腔注射EdU到小鼠體內(nèi)(每公斤小鼠注射5mgEdU),分別于0、12、24小時之后取小鼠腸組織,制成切片用AndyFluor?488azide(綠色,**下圖)檢測細胞的增殖情況,使用DAPI進行復染(藍色)。上海東寰告訴您EdU細胞增殖檢測試劑盒的應(yīng)用范圍。
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本試劑盒小包裝C0085S如果用于培養(yǎng)的細胞(6孔板)的檢測,可以檢測50個樣品,每個樣品的反應(yīng)體系為500μl的Click反應(yīng)液;如果用于96孔板檢測,可以檢測500個樣品,每個樣品的檢測體系為50μl的Click反應(yīng)液;如果用于12孔、24孔、48孔或384孔板樣品的檢測,分別可以檢測125、250、350和1250個樣品,每個樣品推薦的Click反應(yīng)液用量為200μl、100μl、70μl和20μl。小包裝如果用于冰凍或石蠟切片的檢測,可以檢測125-250個樣品,每個樣品的反應(yīng)體系為100-200μl的Click反應(yīng)液。大包裝C0085L可檢測樣品的數(shù)量為小包裝C0085S的4倍。山東正規(guī)EdU細胞增殖檢測試劑盒評價