動(dòng)物的選擇目前常用的模式生物有果蠅、酵母、小鼠、斑馬魚等。目前主要是小鼠黑色素瘤模型。造模方法黑色素瘤小鼠模型可分為誘發(fā)性模型、移植性模型、轉(zhuǎn)基因模型。一、誘導(dǎo)性模型應(yīng)用:誘導(dǎo)的小鼠模型模擬人類受外界因素影響獲得的黑色素瘤,常用于研究預(yù)防黑色素瘤形成。1紫外線誘導(dǎo)的小鼠模型通過紫外線照射獲得的黑色素瘤模型被認(rèn)為是臨床上可靠的模型。方法:有研究者將HGF/SFcDNA表達(dá)的小鼠置于日光燈下用不同劑量(kJ/m2UVB、kJ/m2UVA、)進(jìn)行紫外誘導(dǎo)15min。模型驗(yàn)證:誘導(dǎo)后的小鼠出現(xiàn)皮膚發(fā)紅,偶有淺表皮脫屑,在組織病理學(xué)中觀察到小鼠產(chǎn)生的大多數(shù)皮膚黑色素瘤中具有真皮成分,病變顯示具有垂直生長期或浸潤性惡性黑色素瘤以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,這些病變與人類患者黑色素瘤頁面狀擴(kuò)散的表皮內(nèi)病變特征相似。缺點(diǎn):但野生型或正常型小鼠一般不易發(fā)生UV誘導(dǎo)的黑色素瘤,因此UV誘導(dǎo)的黑色素瘤小鼠模型往往需要聯(lián)合免疫缺陷小鼠,其操作技術(shù)較難、成本較高。2化學(xué)誘導(dǎo)化學(xué)致物誘導(dǎo)黑色素瘤小鼠模型大多采用DMBA和TBA誘導(dǎo)。DMBA是一種免疫抑制多環(huán)芳烴,其致機(jī)理是其活性代謝物被CYP450代謝成致物1,2-環(huán)氧化物-3,4-二醇DMBA,進(jìn)而損傷DNA。TPA是通過蛋白激酶C充當(dāng)啟動(dòng)子。這類動(dòng)物疾病模型是指各種疾病共同性的一些病理變化過程的模型。蘇州提供疾病動(dòng)物模型建模
動(dòng)物模型編輯添加義項(xiàng)名B添加義項(xiàng)?所屬類別:經(jīng)濟(jì)理論動(dòng)物疾病模型主要用于實(shí)驗(yàn)生理學(xué)、實(shí)驗(yàn)病理學(xué)和實(shí)驗(yàn)學(xué)(包括新藥篩選)研究。人類疾病的發(fā)展十分復(fù)雜,以人本身作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象來深入探討疾病發(fā)生機(jī)制,推動(dòng)醫(yī)藥學(xué)的發(fā)展來之緩慢,臨床積累的經(jīng)驗(yàn)不僅在時(shí)間和空間上都存在局限性,而且許多實(shí)驗(yàn)在道義上和方法上也受到限制。而借助于動(dòng)物模型的間接研究,可以有意識(shí)地改變那些在自然條件下不可能或不易排除的因素,以便更準(zhǔn)確地觀察模型的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并與人類疾病進(jìn)行比較研究,有助于更方便、更有效地認(rèn)識(shí)人類疾病的發(fā)展規(guī)律蘇州提供疾病動(dòng)物模型建模哪里可以做動(dòng)物模型?
動(dòng)物模型名稱:FSH聯(lián)合HCG致超排懷孕小鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬:KM小鼠或NIH小鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別:雌性4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡:3~4周齡5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重:16~18g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:SPF級(jí)1、實(shí)驗(yàn)方法:注射用重組人促卵泡***(FSH)聯(lián)合注射絨促性素(HCG)誘導(dǎo)。對(duì)雌鼠于按5IU/只腹腔注射50IU/mL的FSH溶液,注射46~48h后按5IU/只再腹腔注射50IU/mL的HCG溶液,并于注射HCG當(dāng)天下午約16:00~17:00按雌雄鼠1:1合籠。次日早上檢查雌鼠陰栓情況。2、檢測標(biāo)準(zhǔn):合籠后次日雌鼠檢查出現(xiàn)陰栓,表明成功構(gòu)建了超排懷孕小鼠模型。
步驟i.將步驟h的吸附柱放入收集管,12000rpm離心2min。步驟j.吸附柱放到一個(gè)新的,在吸附柱膜**加入50~200μl滅菌水或者洗脫液,停留5min。(將無菌水或者洗脫液加熱到65℃能夠增加洗脫的得率)。步驟i.基因組dna定量,洗脫的基因組dna可以通過電泳鑒定。方法2:一種低成本基因組dna的粗提方法:步驟a.每只小鼠剪下一段尾巴(2-5mm),放入離心管中,加入100μl尾部消化緩沖液,注意不要剪尾太長;步驟b.將離心管及其內(nèi)容物于56℃孵育過夜;步驟c.過夜后將離心管于98℃孵育13min,使蛋白酶k失活;步驟d.在微型離心機(jī)以**大轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)15min,上清直接用于pcr體系(每50μlpcr體系加入上清2μl)。尾消化緩沖液成分:50mmkcl10mmtris-hcl()%tritonx-100(b)長鏈pcr反應(yīng):長鏈引物:pcrprimers1(℃):擴(kuò)增片段:5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):擴(kuò)增片段:3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’pirb基因敲除型有上述兩條擴(kuò)增片段,野生型等位基因沒有擴(kuò)增產(chǎn)物??筛鶕?jù)要求提供構(gòu)建成功的模型動(dòng)物或相關(guān)組織材料。
可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細(xì)胞涂片以及某些薄膜組織的固定。(2)固定的目的①保持其原有狀態(tài):使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì),迅速防止組織、細(xì)胞的死后變化,防止自溶與,防止細(xì)胞過度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu),使之盡量保持生前的狀態(tài)和結(jié)構(gòu)。②以便染色后易于鑒別和觀察:不同組織成分對(duì)染料有不同的親和力,以便染色后易于鑒別和觀察。③使組織塊硬化,便于制作薄片(組織塊在脫水、包埋、切片、染色等過程中不易損壞)。(3)固定液固定液種類:一類是單純固定液,即只有一種試劑;另一類是混合固定液,由兩種或兩種以上試劑組成。作為較好的固定液,應(yīng)有下列特性,首先,有強(qiáng)滲透力,能迅速的滲入組織內(nèi)部;其次,不使組織過度收縮或膨脹,并能使組織內(nèi)欲觀察的成分得以凝固為不溶性物質(zhì);,能使組織達(dá)到一定的硬度并獲得較佳的折光率和對(duì)某些染料具有較強(qiáng)的親和力。固定液通常使用10%的甲醛溶液。特殊要求的組織,常需要特殊的固定液,取樣之前應(yīng)做好準(zhǔn)備。如眼球樣本應(yīng)使用FAS眼球固定液,脂肪組織應(yīng)使用脂肪組織固定液等。此外,在進(jìn)行骨組織樣本制備的時(shí)候,還應(yīng)注意提前進(jìn)行脫鈣處理。廣泛應(yīng)用于藥效評(píng)價(jià)、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)等醫(yī)學(xué)前沿領(lǐng)域。C57小鼠疾病動(dòng)物模型建模說明書
明確研究疾病的獨(dú)特資源確定小鼠疾病模型的初步選擇。蘇州提供疾病動(dòng)物模型建模
2mg組、4mg組、6mg組lh水平均上升,同樣,只有2mg組有明顯升高(p<),如圖3所示。表3表4②體重變化:(mean±sd),如圖4所示:2mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比,大鼠體重***下降(p<,注射第2天開始)。3mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比,大鼠體重***下降(p<,注射第4天開始),直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg組(第1、8天注射)與空白組相比,大鼠體重分別在***次及第二次注射后的有***下降(p<),4mg組體重在停止給藥后4天與空白組無差異。③卵巢重量:如表5、圖5所示,2mg、6mg組大鼠在經(jīng)過順鉑注射后卵巢重量相比對(duì)照組,都有不同程度縮減,其中2mg組卵巢重量明顯減輕(p<),4mg、6mg組無明顯差異。表5④動(dòng)情周期觀察(陰道涂片):3mg組動(dòng)物死亡時(shí)間早,無完整的動(dòng)情周期。如表、圖6所示。正常大鼠動(dòng)情周期4-5天。分為四個(gè)階段,動(dòng)情前期:撇圓形有核上皮細(xì)胞占絕大多數(shù),白細(xì)胞和角化上皮細(xì)胞很少(圖a)。動(dòng)情期:角化上皮細(xì)胞占多大多數(shù),由散在增至集白細(xì)胞和有核上皮細(xì)胞很少(圖b)。動(dòng)情后期:片狀角化上皮細(xì)胞,有核上皮細(xì)胞和白細(xì)胞3種都有,無太大差異(圖c)。動(dòng)情間期:白細(xì)胞占絕大多數(shù),有核上皮細(xì)胞和角化上皮細(xì)胞很少(圖d)。表6⑤病理結(jié)果:如圖7所示蘇州提供疾病動(dòng)物模型建模