疾病動物模型和人類的關(guān)系科學(xué)研究是探索未知，實驗研究的結(jié)果往往會出乎意外，不受人為的控制，所以關(guān)乎人類本身的研究，在人體上進行試驗，風(fēng)險很大；對一些數(shù)量很少的珍稀動物，或一些因體型龐大，不易實施操作的種類，往往用取材容易，操作簡便的另一種動物來進行實驗研究，代替人類或原來的目標(biāo)動物，這就是動物實驗。為了保證這些動物實驗更科學(xué)、準(zhǔn)確和重復(fù)性好，用各種方法把一些需要研究的生理或病理活動相對穩(wěn)定地顯現(xiàn)在標(biāo)準(zhǔn)化的實驗動物身上，供實驗研究之用。這就稱之為動物實驗中的動物模型。早期階段科學(xué)假說與疾病潛在藥物治療效果評價始于小鼠疾病模型構(gòu)建及其實驗室研究。閔行區(qū)C57小鼠疾病動物模型建模

    ng）=×片段堿基對數(shù)（單片段）；適片段用量（ng）=×片段堿基對數(shù)（多片段）。注1：單片段重組反應(yīng)，若單個插入片段的長度大于載體，則應(yīng)將載體與插入片段的計算公式互換；注2：單片段重組反應(yīng)，若單個插入片段的長度小于200bp，則插入片段應(yīng)使用5倍的用量；注3：多片段重組反應(yīng)，各個插入片段的用量應(yīng)不少于10ng，使用上述公式計算適使用量低于此值時，直接使用10ng；注4：若按上述公式計算出的線性化載體用量低于50ng或高于200ng，建議按50ng或200ng用量使用；注5：線性化載體過長，插入片段過長或片段數(shù)過多，克隆陽性率均會降低。2、體系反應(yīng)；1、配制完成后，用移液器輕輕吸打混勻各組分，避免產(chǎn)生氣泡，切勿渦旋；2、將反應(yīng)體系置于50℃，反應(yīng)5~60min。3、將反應(yīng)液離心管置于冰上冷卻，之后進行轉(zhuǎn)化或者儲存于-20℃注1：推薦使用PCR儀等溫控的儀器進行反應(yīng)，反應(yīng)時間不足或太長克隆效率均會降低；注2：插入1~2個片段時，推薦反應(yīng)時間為5~1min；插入3~5個片段時，推薦反應(yīng)時間為15~30min；注3：當(dāng)載體骨架在10kb以上或插入片段總長在4kb以上時，推薦延長反應(yīng)時間至30~60min；注4：建議在50℃反應(yīng)完成后進行瞬時離心，將反應(yīng)液收集至管底。注5：-20℃儲存的重組產(chǎn)物。纖維化疾病動物模型建模原理動物疾病模型廣泛應(yīng)用于新藥靶點發(fā)現(xiàn)及篩選。

建立一種理想的腰椎間盤突出的動物模型對本病的機制研究和臨床防治具有重要意義?，F(xiàn)有模型對腰椎間盤突出癥的模擬均存在明顯不足，或與臨床實際病變部位有一定差距，如慢性坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型；或操作難度大，對動物損傷重，如自體髓核移植模型，選擇性神經(jīng)根結(jié)扎模型。因此，急需一種新的操作簡單，重復(fù)率高，穩(wěn)定且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤突出后癥狀的動物模型。技術(shù)實現(xiàn)要素：為了建立一種操作簡單，穩(wěn)定好且能準(zhǔn)確模擬腰椎間盤突出后癥狀的動物模型，本發(fā)明提供了一種大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型的制備方法。其包括以下步驟：步驟一、麻醉大鼠；步驟二、于大鼠腰4到骶1水平左側(cè)或右側(cè)作縱行切口，切開皮膚，鈍性分離椎旁肌，暴露腰4椎間孔和腰5椎間孔；步驟三、將壓迫元件插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中，得到大鼠慢性背根神經(jīng)壓迫模型。其中，步驟一具體為：腹腔注射1％戊巴比妥鈉(40mg/kg)麻醉大鼠后，將大鼠背部剃毛，碘伏消毒背部皮膚，俯臥位固定于動物手術(shù)臺上，鋪無菌巾。在一個具體實施方式中，壓迫元件為l型棒；步驟三具體為：將2根l型棒的***端分別插入到左側(cè)或右側(cè)腰4椎間孔及腰5椎間孔中，l型棒的第二端置于腰4椎間孔及腰5椎間孔外。

pcrmix：反應(yīng)條件：pcr擴增產(chǎn)物的電泳鑒定結(jié)果如圖3所示，從圖3中可以看出，6、8、9號為pirb基因敲入小鼠在、，wt小鼠pcr產(chǎn)物沒有這兩個擴增產(chǎn)物。(c)短鏈pcr反應(yīng)，引物如下：primers(℃):forwardprimer(f4):5’-aacaatcaggctgccgaatctg-3’reverseprimer(r4):5’-ctttattagccagaagtcagatgc-3’expectedpcrproduct:targetedallele:344bppirb基因敲入型小鼠能夠擴增出344bp的產(chǎn)物，而野生型沒有。pcr體系：反應(yīng)條件：(2)f1代小鼠測序：通過pcr擴增后測序鑒定小鼠基因型，如圖4所示，為6號pirb基因敲入小鼠測序峰圖，pcr所用引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1：5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer(r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’(3)southern雜交檢測f1代小鼠基因型：采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割dna分子，切割示意圖如圖5。具體的southern雜交檢測過程如下：步驟a、提取f1代小鼠尾部dna；步驟b、制備探針，通過pcr方法將dig-dutp滲入到步驟a的dna分子中。上海東寰告訴您如何選擇好的動物模型。

    流水線作業(yè)，這樣能節(jié)省時間，并且能保證樣品的質(zhì)量。如果請人，每個人需要負(fù)責(zé)哪一板塊的工作，比如誰負(fù)責(zé)麻醉，誰負(fù)責(zé)取血液，誰負(fù)責(zé)取，誰負(fù)責(zé)拍照、誰負(fù)責(zé)儲存，都需要提前規(guī)劃交代清楚。實驗指標(biāo)檢測如果是需要自己做的檢測，比如常見的WesternBlot、PCR，建議提前可以看看教程（無論是視頻還是貼吧，都要自己多方參考）。有了一定的理論基礎(chǔ)后，再向老師、師兄師姐學(xué)習(xí)經(jīng)驗和技術(shù)，如果實驗平臺的儀器需要提前預(yù)約，建議提前規(guī)劃好使用的時間。反復(fù)總結(jié)尋找答案在整個預(yù)實驗的過程中可能會出現(xiàn)很多問題。比如造模效果欠佳、灌胃操作不當(dāng)、腹腔注射操作失誤、使用不當(dāng)?shù)纫饎游锼劳?。每遇到問題都需要自己想辦法解決，可以從導(dǎo)師、師兄師姐、文獻、貼吧、視頻教程等找到答案。比如筆者曾遇到同樣的給藥，發(fā)現(xiàn)有的大鼠麻醉得很深，有的大鼠還活蹦亂跳，在反復(fù)嘗試調(diào)整濃度，給藥劑量，更換麻醉方式，后來才發(fā)現(xiàn)是動物體重秤的準(zhǔn)度有問題，導(dǎo)致體重秤得不準(zhǔn)。因此，需要自己反復(fù)琢磨到底是實驗過程中哪一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，逐一排除。也要求在每一個實驗步驟需要標(biāo)準(zhǔn)化，統(tǒng)一化，盡可能的排除干擾因素，這樣方便在遇到問題快的找到答案。同時，建議每日總結(jié)。疾病動物模型建模好做嗎？泰州疾病動物模型建模優(yōu)勢

查閱已有的相關(guān)小鼠模型綜述文獻。閔行區(qū)C57小鼠疾病動物模型建模

誘導(dǎo)模型實驗動物：小鼠、豚鼠、大鼠造模試劑：煙霧、空氣污染物及有害氣體（PM2.5、臭氧、二氧化氮）、脂多糖、彈性蛋白酶獲得方式：動物全身長時間放置在密閉容器內(nèi)，暴露于煙霧、空氣污染物或者有害氣體；氣管內(nèi)滴注脂多糖或者彈性蛋白酶。模型特點：煙霧、空氣污染物或者有害氣體誘導(dǎo)模型使用的物質(zhì)、暴露的劑量、頻次和時間不盡相同；脂多糖造模時間短，可用來模擬急性加重反應(yīng)，但不能反應(yīng)慢性病變的過程，通常需要和其他造模方法聯(lián)用。2.基因模型實驗動物：α1-抗胰蛋白酶等基因敲除小鼠獲得方式：直接購買模型特點：α1-抗胰蛋白酶基因敲除小鼠是經(jīng)典的COPD轉(zhuǎn)基因模型，更準(zhǔn)確地理解易感基因的致病機制。閔行區(qū)C57小鼠疾病動物模型建模