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來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-06-29

    特發(fā)性肺纖維化(IPF)小鼠模型建立一、目的:博萊霉素致肺纖維化模型建立二、材料:博萊霉素藥液配制:4mg/ml();三、方法:1、BALB/c小鼠麻醉,6-8周齡,體重20~25g,仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,頸部去毛后酒精消毒,切開皮膚,逐層暴露氣管;2、將1mL注射器經(jīng)兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管,回抽無(wú)阻力;3、注入博萊霉素(約4~5mg/kg)再向氣管內(nèi)注入~3次,使藥物在肺部分布均勻;4、以大鼠身體長(zhǎng)軸為中心,正反快速旋轉(zhuǎn)鼠板1~2分鐘??p合皮膚,局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止,室溫保持在24~25℃,待動(dòng)物自然清醒后置籠內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)。肺纖維化模型發(fā)展時(shí)間:2周可見肺系數(shù)(肺重/體重×100%)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),以淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞為主,并有肺泡壁增厚、成纖維細(xì)胞增生等Ⅱ級(jí)肺泡炎表現(xiàn)4周可見肺間質(zhì)內(nèi)有大量散在綠染的膠原纖維,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,見有許多纖維細(xì)胞等Ⅲ級(jí)肺間質(zhì)纖維化病變。大鼠模型病理組織學(xué)與病理生理學(xué)改變與人類肺間質(zhì)纖維化相似。其病變?cè)缙诒憩F(xiàn)為滲出性肺泡炎,炎癥細(xì)胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質(zhì)纖維化,間質(zhì)細(xì)胞增生,基質(zhì)膠原聚集取代正常的肺組織結(jié)構(gòu)。四、檢測(cè):組織病理切片HE染色。小鼠疾病模型研究也是人相關(guān)疾病藥物研發(fā)的起點(diǎn)。如何使用疾病動(dòng)物模型建模公司

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其中可以看出手術(shù)側(cè)后爪的縮足閾值較手術(shù)前及對(duì)側(cè)后爪有***降低,且標(biāo)準(zhǔn)誤區(qū)間非常小。圖4是表1的數(shù)據(jù)通過曲線圖的方式展現(xiàn)。結(jié)果顯示:大鼠在術(shù)后***天即出現(xiàn)手術(shù)側(cè)后爪敏感,施加輕微的重量(4g左右)都會(huì)引起縮足表現(xiàn),這說明其痛閾明顯降低,對(duì)輕微的刺激均呈現(xiàn)抬腳,舔舐后足等痛覺過敏表現(xiàn)。這種表現(xiàn)維持至術(shù)后至少28天。而對(duì)側(cè)后爪在術(shù)前和術(shù)后縮足閾值變化不大,基本保持在20-25g。實(shí)施例3、模型的應(yīng)用采用實(shí)施例1中描述的方法對(duì)兩組大鼠均進(jìn)行了造模,l型棒的材料選擇的是h62黃銅或聚乳酸等不受磁場(chǎng)干擾、置入體內(nèi)不會(huì)對(duì)神經(jīng)造成化學(xué)刺激以及具有一定可塑性的材料。在造模后第七天應(yīng)用重復(fù)經(jīng)顱磁刺激(rtms)***大鼠,其中一組接受了真的磁刺激,為磁刺激組;另一組接受了假的磁刺激,為假刺激組。結(jié)果顯示,磁刺激組的大鼠縮足閾值較假刺激組明顯提高,如圖5所示。這表明磁刺激緩解了神經(jīng)壓迫造成的疼痛,該模型可以用于磁刺激***的研究。以上詳細(xì)描述了本發(fā)明的較佳具體實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)理解,本領(lǐng)域的普通技術(shù)無(wú)需創(chuàng)造性勞動(dòng)就可以根據(jù)本發(fā)明的構(gòu)思作出諸多修改和變化。因此。淮安疾病動(dòng)物模型建模說明書臨床上平時(shí)不易見到的疾病可用動(dòng)物隨時(shí)復(fù)制出來。

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    代謝組學(xué)的研究對(duì)象大都是相對(duì)分子量在1000以內(nèi)的小分子物質(zhì),因此常用的血液樣本在取樣后,應(yīng)小心操作,防止溶血,盡快分離出血清,分置于溫環(huán)境下保存。由于用于病理實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物組織采集相對(duì)其他樣品的采集,操作更繁瑣,在處理過程中許多細(xì)節(jié)容易忽略,造成數(shù)據(jù)不完美(甚至不能用)。因此接下來將重點(diǎn)介紹組織樣品采集的注意事項(xiàng)及其固定。組織樣品采集注意事項(xiàng)組織應(yīng)新鮮,操作時(shí)間盡可能短,否則細(xì)胞發(fā)生死后變化、自融及現(xiàn)象。是動(dòng)物心臟還在跳動(dòng)時(shí)采集,樣本取出后在5分鐘以內(nèi)置于固定液內(nèi),避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣環(huán)境中。組織塊盡量小而薄。組織塊的厚度以不超過5mm為宜,較為理想的厚度為2mm左右,主要目的是使固定液迅速而均勻的滲入組織塊內(nèi)部。勿使組織塊受擠壓。在采集過程中,應(yīng)盡量選擇較為鋒利的手術(shù)器械,如手術(shù)刀片等,避免操作過程中擠壓挫傷標(biāo)本。擠壓過的組織均不可用。固定液的量一般以組織塊大小的20倍為宜,組織能夠在容器內(nèi)自由移動(dòng)。盡量保持組織的原有形態(tài)。新鮮組織經(jīng)固定后,或多或少產(chǎn)生收縮現(xiàn)象(如胃腸),為此可將組織展平,以盡可能維持原形。保持組織清潔。組織塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等,可用生理鹽水沖洗。

    3)基因/蛋白質(zhì)表達(dá)定性或定量檢測(cè)在進(jìn)行分子檢測(cè)的過程中,保持核酸和蛋白質(zhì)的完整性至關(guān)重要,因此在取樣過程中,應(yīng)盡量避免核酸及蛋白質(zhì)的降解。如不注意采樣過程,將會(huì)導(dǎo)致樣本中的核酸及蛋白質(zhì)的無(wú)差別降解,嚴(yán)重影響后續(xù)分子檢測(cè)結(jié)果。在條件允許的情況下,組織樣本在離體后應(yīng)立刻裝入凍存管內(nèi),并立即放入液氮中進(jìn)行冷凍。在RNA提取樣本的保存過程中,可以選擇非冷凍型RNA保存液或Trizol試劑進(jìn)行RNA酶的抑制。針對(duì)蛋白質(zhì)提取樣本的保存,我們同樣可以使用商品化的蛋白酶抑制劑進(jìn)行短期處理。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction,PCR)及免疫印跡(Westernblotting,WB),這兩種實(shí)驗(yàn)手段是分子生物學(xué)檢測(cè)中不可或缺的一部分,也是發(fā)表論文至關(guān)重要的分子檢測(cè)數(shù)據(jù)。PCR主要用來對(duì)基因在基因組層面或轉(zhuǎn)錄層面的變化進(jìn)行定性或定量檢測(cè),而WB則主要用來對(duì)某一蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè)。(4)轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)檢測(cè)隨著檢測(cè)水平及相關(guān)產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展,各類組學(xué)檢測(cè)的降低,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中也常常運(yùn)用組學(xué)檢測(cè)來提升實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的檔次。在我們進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白質(zhì)組學(xué)的檢測(cè)過程中,同樣是要首先確保目標(biāo)RNA或蛋白質(zhì)的片段完整性。動(dòng)物疾病模型廣泛應(yīng)用于新藥靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)及篩選。

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長(zhǎng)久以來人們發(fā)現(xiàn),以人本身作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象來推動(dòng)醫(yī)學(xué)的發(fā)展是困難的,臨床所積累的經(jīng)驗(yàn)不僅在時(shí)間和空間上存在著局限性,許多實(shí)驗(yàn)在道義上和方法學(xué)上還受到種種限制。而動(dòng)物模型的吸引力就在于它克服了這些不足點(diǎn),其在生物醫(yī)學(xué)研究中所起到的獨(dú)特作用,正受到越來越多的科技工作者的重視。動(dòng)物模型的優(yōu)越性主要表現(xiàn)在以下幾下方面。(一)避免了在人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所帶來的風(fēng)險(xiǎn)臨床上對(duì)外傷、中毒、腫痛病因等研究是有一定困難的,甚至是不可能的,如急性和慢性呼吸系統(tǒng)疾病研究進(jìn)很難重復(fù)環(huán)境污染的作用。輻射對(duì)機(jī)體的損傷也不可能在人身上反復(fù)實(shí)驗(yàn)。而動(dòng)物可以作為人類的替難者,在人為設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件下反復(fù)觀察和研究。如何定義好的小鼠疾病模型?奉賢區(qū)疾病動(dòng)物模型建模供應(yīng)商

小鼠疾病模型有助于遺傳性疾病致病基因的發(fā)現(xiàn)與驗(yàn)證。如何使用疾病動(dòng)物模型建模公司

2mg組、4mg組、6mg組lh水平均上升,同樣,只有2mg組有明顯升高(p<),如圖3所示。表3表4②體重變化:(mean±sd),如圖4所示:2mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比,大鼠體重***下降(p<,注射第2天開始)。3mg組(連續(xù)注射7天)與空白組相比,大鼠體重***下降(p<,注射第4天開始),直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg組(第1、8天注射)與空白組相比,大鼠體重分別在***次及第二次注射后的有***下降(p<),4mg組體重在停止給藥后4天與空白組無(wú)差異。③卵巢重量:如表5、圖5所示,2mg、6mg組大鼠在經(jīng)過順鉑注射后卵巢重量相比對(duì)照組,都有不同程度縮減,其中2mg組卵巢重量明顯減輕(p<),4mg、6mg組無(wú)明顯差異。表5④動(dòng)情周期觀察(陰道涂片):3mg組動(dòng)物死亡時(shí)間早,無(wú)完整的動(dòng)情周期。如表、圖6所示。正常大鼠動(dòng)情周期4-5天。分為四個(gè)階段,動(dòng)情前期:撇圓形有核上皮細(xì)胞占絕大多數(shù),白細(xì)胞和角化上皮細(xì)胞很少(圖a)。動(dòng)情期:角化上皮細(xì)胞占多大多數(shù),由散在增至集白細(xì)胞和有核上皮細(xì)胞很少(圖b)。動(dòng)情后期:片狀角化上皮細(xì)胞,有核上皮細(xì)胞和白細(xì)胞3種都有,無(wú)太大差異(圖c)。動(dòng)情間期:白細(xì)胞占絕大多數(shù),有核上皮細(xì)胞和角化上皮細(xì)胞很少(圖d)。表6⑤病理結(jié)果:如圖7所示如何使用疾病動(dòng)物模型建模公司