如何科學正確地使用凍存管-杭州邁恩

來源：發(fā)布時間：2024-10-21

凍存管的使用是一門學問，并不是打開液氮罐、放入凍存管、關上液氮罐這樣簡單的三部曲可以完成的?？茖W正確地使用凍存管，可以避免樣本的損失，并保護試驗人員的安全。

冷凍步驟

1.用預熱的PBS溶液洗滌細胞，吸取溶液，含有胰蛋白酶和EDTA的溶液覆蓋細胞(薄薄的液層足夠，胰蛋白酶和EDTA的濃度需要根據(jù)細胞系確定)。

2.37℃孵育細胞3-5分鐘。

3.細胞從底部脫離之后，終止孵育，加入含有血清的培養(yǎng)基，用移液器輕輕地懸浮細胞。

4.離心細胞懸液(500 x g, 5分鐘)，用含有血清的培養(yǎng)基重新懸浮。

5.細胞計數(shù)。

6.離心細胞懸液(500 x g, 5分鐘)，去除上清液，用適量體積的含有血清的培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

7.以1:1體積比混合細胞和凍存液(60%培養(yǎng)基，20%胎牛血清，**MSO)，然后轉移到Cryo.sTM凍存管中。凍存的細胞密度為 1-5×106 個/毫升。

8.含有細胞的Cryo.sTM凍存管建議以?1 K / min 的速率降溫，可以將凍存管置于?70℃含有異丙醇的容器中。如果Cryo.sTM凍存管存儲其他樣品，可以直接放置在?20℃，?70℃或者液氮的氣相。為了確保樣品冷凍均勻，4 mL和5 mL的Cryo.sTM凍存管需要先置于在?20℃冰箱過夜，然后再轉移到?70℃或者液氮的氣相。

9.然后轉移Cryo.sTM凍存管到液氮罐。為了避免污染(如支原體)和安全考慮，請將Cryo.sTM凍存管置于液氮的氣相，切勿置于液相。

解凍步驟

1.從液氮罐取出凍存的細胞后立即置于37℃水浴搖晃Cryo.sTM凍存管1-2分鐘。解凍過程需要越快越好。

2.轉移解凍的細胞于15 mL離心管，立即用大量的含有血清的細胞培養(yǎng)基混勻。

3.500 x g離心細胞5 分鐘，去除上清液，用適量的含有血清的細胞培養(yǎng)基重新懸浮細胞，然后轉移到細胞培養(yǎng)瓶。

4.按照建議的細胞濃度接種。

5.接下來的12小時細胞進入靜默期。

6.間隔24小時和48小時更換培養(yǎng)基。

標簽：格柵膜過濾膜血清移液管

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