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FucosEXO中的酶在大腸桿菌中表達(dá),帶有His標(biāo)簽,分子量為87 kDa和64 kDa。FucosEXO在天然條件下水解糖蛋白上的巖藻糖,在6至8的pH值范圍內(nèi)顯示出高活性,無需輔助因子或添加劑。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式;2. 可以結(jié)合酶以提高效率;3. 適用于自動(dòng)化工作流程;4.即用型 - 只需加水即可。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于在 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上有效水解 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖。人血清中 O-糖蛋白的富集:GlycOCATCH還可用于從復(fù)雜的樣品混合物(如人血清)中選擇性富集O-糖基化蛋白。簡(jiǎn)而言之,用Genovis的SialEXO處理血清并應(yīng)用于GlycOCATCH樹脂。洗滌樹脂,用8M尿素洗脫O-糖基化蛋白。用胰蛋白酶消化樣品并使用 RP-LC-MS/MS 進(jìn)行分析,并使用 Swiss Prot 數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)列表。O-糖基化蛋白以黃色表示。依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖。河南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)
由于蛋白質(zhì)的O-糖模式的異質(zhì)性和O-糖結(jié)構(gòu)的OpeRATOR特異性,形成了重疊的肽,從而可以獲得O-糖位點(diǎn)的完整圖譜為了進(jìn)行比較,相同材料的標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶消化物, 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進(jìn)行O-糖位點(diǎn)定位:OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點(diǎn)的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會(huì)產(chǎn)生攜帶O-糖的糖肽,并能夠使用質(zhì)譜法進(jìn)行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級(jí)分析。下面是OpeRATOR消解位點(diǎn)的示意圖。江蘇高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達(dá)。
用于水解β1-3,4-連接半乳糖的固定化酶在離心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的GalactEXO酶,用于糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的水解,而不會(huì)用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. z終樣品中不含酶。GalactEXO 酶來源于 Akkermansia muciniphila 并重組表達(dá),可有效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖。GalactEXO微離心柱經(jīng)過格式化,可在30-60分鐘內(nèi)水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。
Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接巖藻糖殘基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖結(jié)構(gòu)分析以及寡糖的外切糖苷酶陣列的寶貴工具。1. 高效α-巖藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖;2. 可靠的酶解增加了對(duì)外切糖苷酶陣列的信心;3. 可固定在即用型離心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的凍干酶。Genovis的FucosEXO凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于2mg糖蛋白的去碳基化。ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應(yīng)的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。
當(dāng)在完整狀態(tài)下進(jìn)行分析時(shí),EPO的聚糖異質(zhì)性導(dǎo)致了非常復(fù)雜的質(zhì)譜圖。通過在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時(shí),可以有效地去除 N 糖(含有PNGase F酶)和 O-糖,如對(duì)應(yīng)于未修飾蛋白質(zhì)的單個(gè)峰所示。EPO上殘留了少量用乙?;僖核嵝揎椀腛-聚糖,因?yàn)镺mniGLYZOR對(duì)這種結(jié)構(gòu)的水解效率低下。根據(jù)制造商Genvois的建議(在37°C下進(jìn)行O/N孵育),兩種底物蛋白也用另一種市售的去糖基化產(chǎn)物處理,并顯示數(shù)據(jù)以供比較。另一方面,N-聚糖在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中翻譯地連接到未折疊的蛋白質(zhì)上。這導(dǎo)致某些 N-糖基化位點(diǎn)難以被 Genovis的PNGase F 接近,或者一旦底物蛋白折疊成其天然狀態(tài),就根本無法接近。因此,這種N-聚糖的水解需要底物蛋白以與酶活性相容的方式變性。固定形式可提高酶與底物的比率,快速去糖基化。江蘇高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)
用SialEXO對(duì)依那西普糖蛋白去唾液酸化,并用ProteinSimple成像等電聚焦分析。河南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)
生成攜帶 O-糖的糖肽,該酶可實(shí)現(xiàn) O-糖譜分析、O-糖肽圖譜和位點(diǎn)占用測(cè)定,以及使用 MS 分析的中級(jí)方法。1.可靠O-聚糖特異性蛋白酶 – 消化絲氨酸/蘇氨酸糖基化位點(diǎn)的 N 末端;2.穩(wěn)健的消化,增強(qiáng)復(fù)雜生物制藥的表征;3.高特異性 - 可靠的聚糖位點(diǎn)測(cè)定和定位。Genovis的OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化攜帶he心1 O-聚糖的蛋白質(zhì),糖基化(he心 1)Ser 和 Thr 殘基的 N 端。OpeRATOR 來源于 Akkermansia muciniphila,并以 E 表達(dá)。大腸桿菌。該酶含有 His 標(biāo)簽,分子量為 42 kDa。SialEXO 來源于 Akkermansia muciniphila,并以 E 表達(dá)。大腸桿菌。SialEXO Lyophilized 中的酶也含有 His 標(biāo)簽,這些組分的分子量分別為 43 kDa 和 66 kDa。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽的凍干酶。Genovis的OpeRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在 2000 個(gè)單位的小瓶中,用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。河南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)