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陜西固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

來源: 發(fā)布時間:2024-07-03

GalNAcEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的GalNAcEXO酶,用于水解糖蛋白上的GalNAc殘基,而不會用酶污染制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. 終樣品中不含酶。用于水解離心柱中糖蛋白上的Genovis的GalNAc殘基的固定化酶。GalNAcEXO 酶是一種n 外α-N-乙酰半乳糖氨酸酶,可快速有效地水解來自天然 O-糖蛋白的 z es GalNAc 殘基。 該酶來源于Akkermansia muciniphila,在大腸桿菌中表達,帶有His標簽,分子量為52 kDa。 該酶在 Tn 抗原和 α1-3 連接末端 GalNAcs 上均顯示活性。在這里,我們展示了如何使用GalNAcEXO來表征復雜的生物制藥。復雜樣品的特異性凈化;改進 MS 分析的樣品制備。陜西固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

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上海倍篤生物科技有限公司(簡稱“倍篤生物”),由中國科學院及生物醫(yī)藥產業(yè)界人士,于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材(如Genovis的IdeS酶),遵守相關法規(guī)要求,如cGMP規(guī)范、ISO13485質量管理體系認證等,致力于為診斷領域如分子診斷及病原微生物檢測研發(fā)等,藥物研發(fā)領域如細胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī)、高質量物料及專業(yè)服務,以期與客戶共同協(xié)作,加快研發(fā)及生產進度,為客戶提供更多價值。云南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究O-連接聚糖通常存在于蛋白質的暴露位置,因為它們在蛋白質折疊發(fā)生后附著。

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由于蛋白質的O-糖模式的異質性和O-糖結構的OpeRATOR特異性,形成了重疊的肽,從而可以獲得O-糖位點的完整圖譜為了進行比較,相同材料的標準胰蛋白酶消化物, 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進行O-糖位點定位:OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產生攜帶O-糖的糖肽,并能夠使用質譜法進行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點的示意圖。

與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗體、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和簡單的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于減少異質性,以促進蛋白質的分析,例如質譜法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-連接聚糖的快速高效去糖基化;即用型離心柱形式 - 無酶干擾分析;與LC-MS兼容。與PNGase F類似,Genvois的與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常見的粘蛋白型 O-糖所需的酶,即單唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 (α-GalNAc)。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下組分:PNGase?F;O-糖苷酶。O-糖基化生物制藥(如依那西普)表征:PNGase F、OglyZOR。

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SialEXO 2-3 在天然條件下水解糖蛋白,在 pH 值范圍為 7.0 至 9.0 時顯示出活性。該酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。該酶具有 His 標簽,分子量為 66 kDa。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式;2. 可以結合酶以提高用于離心柱中糖蛋白去唾液酸化的固定化酶。Genovis的SialEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的SialEXO酶,用于糖蛋白的去唾液酸化,而不會被酶污染z終制劑。它水解天然糖蛋白上的唾液酸(α2-3、α2-6 和 α2-8)并釋放出聚糖。效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。OglyZOR 是一種內切糖苷酶,可特異性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖;云南凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

GlycOCATCH的應用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學、復雜樣品的研究和生物制藥的表征。陜西固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

當在完整狀態(tài)下進行分析時,EPO的聚糖異質性導致了非常復雜的質譜圖。通過在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時,可以有效地去除 N 糖(含有PNGase F酶)和 O-糖,如對應于未修飾蛋白質的單個峰所示。EPO上殘留了少量用乙酰化唾液酸修飾的O-聚糖,因為OmniGLYZOR對這種結構的水解效率低下。根據制造商Genvois的建議(在37°C下進行O/N孵育),兩種底物蛋白也用另一種市售的去糖基化產物處理,并顯示數據以供比較。另一方面,N-聚糖在內質網中翻譯地連接到未折疊的蛋白質上。這導致某些 N-糖基化位點難以被 Genovis的PNGase F 接近,或者一旦底物蛋白折疊成其天然狀態(tài),就根本無法接近。因此,這種N-聚糖的水解需要底物蛋白以與酶活性相容的方式變性。陜西固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis