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上海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

來源: 發(fā)布時間:2024-10-03

在抗體藥物及核酸藥物領域,倍篤生物產品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程,主要用——RNA轉染試劑、生物活性物質純化分離用填料產品、ADC的payload抗體(如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等)、動物造模用陽性及陰性抗體、泊洛沙姆P 188 Bio、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、抗體結構域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,品牌有瑞典Genovis、德國BASF、美國QED、中國君研生物、中國金傳生物、中國毫厘科技、中國再帆生物等。這些國產品牌都具有國內自研、自產能力,批次生產穩(wěn)定可靠、品質可控,為行業(yè)發(fā)展提供更多國產選擇。GalactEXO微離心柱經過格式化,可在30-60分鐘內水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。上海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

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該酶適用于在釋放的聚糖結構上修剪半乳糖,用于外切糖苷酶陣列,或用于生成具有均相 G0/G0F 聚糖譜的抗體。1. 高效β-半乳糖苷酶混合物 – 快速去除末端 β1-3 和 β1-4-連接的半乳糖;2. 有助于在亞基水平上識別糖基化修飾;3. 可固定在即用型離心柱中。Genovis的GalactEXO是一種外切糖苷酶,含有β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白或寡糖上的半乳糖殘基。該混合物由兩種半乳糖苷酶組成,可高效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖酶。GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白,并在5.5至7.5的寬pH值范圍內顯示活性。陜西瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶糖生物學研究并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亞基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分別分析。

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Genovis的OglyZOR 是一種內切糖苷酶(O-糖苷酶),可特異性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖,用于糖分析、確認 O-糖的存在和降低樣品的異質性。Genovis的OglyZOR 是一種內切糖苷酶(內切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶),可催化來自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸,因此,由唾液酸酶混合物組成的唾液酸凍干,用于去除α2-3,α2-6和α2-8連接的唾液酸,與OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下獲得良好活性。

使用Genovis的OpeRATOR圖譜O-聚糖位點對依那西普進行LC-MS分析:依那西普是一種 Fc 融合蛋白,具有高度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。將依那西普與OpeRAT一起孵育,并使用LC-MS/MS分析所得糖肽。促紅xibao生成素 (EPO) 是一種具有單個 O-糖基化位點的 ~30 kDa 糖蛋白。在PNGase F去除N-糖并使用SialEXO進行去唾液酸化后,用OpeRAT消化天然蛋白,并通過反相LC-MS分析所得蛋白質片段。O-糖基化的位點可以通過識別OeRATOR消化位點直接推斷出來。為了獲得良好性能,需要去除唾液酸助劑,因此購買中包括2000個單位(如果SialEXO凍干)。1. 用于方法開發(fā)的靈活產品形式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。O-聚糖是OpeRATOR活性所必需的,而該酶在N-聚糖上沒有活性。OpeRATOR和SialEXO處理后,O-糖基化蛋白被消化成攜帶O-聚糖的肽。消化發(fā)生在O-糖基化位點的N端。SialEXO、FabRICATOR消化去糖基化蛋白,通過中級質譜測定完整質量數。

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Genvis測試去除唾液酸以揭示電荷變體:唾液酸是帶負電荷的糖殘基,存在于 N- 和 O-連接的聚糖上。唾液酸的固有電荷可能會使分析工作流程復雜化,從而掩蓋其他重要的修飾。Microspin 色譜柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的離心柱;2. 提高酶與底物的比例,提高消化效率;3. 樣品中不含酶。因此,唾液酸的去除有助于研究蛋白質中的潛在變體。該應用展示了一種快速簡便的樣品制備方法,可在電荷異構體分析之前去除所有唾液酸。連接的巖藻糖殘基,而對于非常復雜的樣品可能需要更長的孵育時間。用于自動化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

曲妥珠單抗Fc N-糖可以表征游離N-糖以及去糖基化抗體的功能和結構。上海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

OglyZOR 來源于口腔鏈球菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 227 kDa。SialEXO來源于Akkermansia muciniphila,在大腸桿菌中表達。SialEXO酶含有His標簽,組分的分子量分別為42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶;2. 降低樣品異質性,揭示潛在的關鍵蛋白質修飾;3. 完全、穩(wěn)健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的凍干酶,用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 個單位的小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助劑才能發(fā)揮作用,因此與2000單位的SialEXO凍干一起提供。上海高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究