C1抑制劑的去糖基化:在O-糖基化生物制藥的生產(chǎn)過(guò)程中,由于he心GalNAc殘基的加工不完全,可能會(huì)出現(xiàn)Tn抗原。這表現(xiàn)為具有 203 Da HexNAc 單位差異的重復(fù)質(zhì)量位移。為了確認(rèn) Tn 抗原的存在,可以應(yīng)用以下工作流程,此處在重度(26 個(gè)位點(diǎn))O-糖基化 C1 抑制劑上演示。首先,使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖,使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能測(cè)試?:依那西普是另一種具有挑戰(zhàn)性的生物制藥模型分子,攜帶 13 個(gè) O-聚糖位點(diǎn),其中平均 9 至 10 個(gè)位點(diǎn)被占用。用于水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的α1-2、α1-3和α1-4-連接巖藻糖殘基。凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶
Genovis 集團(tuán)由瑞典 Genovis AB 和美國(guó)全資子公司 Genovis Inc. 組成。該公司的在納斯達(dá)克北方增長(zhǎng)市場(chǎng)上市。如需了解更多信息,請(qǐng)?jiān)L問(wèn)投資者關(guān)系。 Genovis的經(jīng)營(yíng)理念是為生物制藥和研究行業(yè)的客戶提供工具,以促進(jìn)和節(jié)省開(kāi)發(fā)新治療方法和診斷的時(shí)間。Genovis 酶產(chǎn)品,稱為 SmartEnzymes,被世界各地的科學(xué)家使用,創(chuàng)新的產(chǎn)品形式促進(jìn)了生物藥物的開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制。 通過(guò)在2020年收購(gòu)QED Bioscience,產(chǎn)品組合已擴(kuò)大到包括用于研究、生物藥物開(kāi)發(fā)和診斷檢測(cè)的抗體和試劑。在 網(wǎng)站 上閱讀有關(guān)QED的更多信息 Genovis 研發(fā)活動(dòng)的基石是客戶關(guān)系,使產(chǎn)品開(kāi)發(fā)能夠滿足客戶需求。與專注于表征新酶、開(kāi)發(fā)新工作流程和新靶點(diǎn)抗體的學(xué)術(shù)團(tuán)體的合作同樣有價(jià)值。陜西瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成,均帶有His標(biāo)簽,組分的分子量為87 kDa和109 kDa。
Genovis的PNGase F Automation 含有以自動(dòng)化友好的 96 孔板形式凍干的 PNGase F 酶。它能夠?qū)崿F(xiàn)高通量 N-糖去除,從而簡(jiǎn)化一系列糖蛋白底物的下游分析。根據(jù)您的工作流程要求和樣品可用性。PNGase F Automation 可在 96 孔板中凍干,用于 96 x 5 μg 或 96 x 50 μg 糖蛋白上的 N-糖自動(dòng)水解。1. 實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化高通量樣品處理;2. 可同時(shí)消解多達(dá) 96 個(gè)樣品;3. 兩種選擇可用于不同樣品量的消解;4. 即用型 - 只需添加您的樣品即可。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽(包括唾液酸化O-聚糖)的凍干酶。Genovis的ImpaRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。1. 用于方法開(kāi)發(fā)的靈活產(chǎn)品形式;2.以結(jié)合酶以提高效率;3. 適用于自動(dòng)化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可!
Genovis 是一家瑞典生物技術(shù)公司,自2010年起,為生物制藥公司提供SmartEnzymes?工具酶。Genovis提供一系列獨(dú)特、快速且易于使用的酶學(xué)工具,主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界。 我們?cè)谌蚍秶鷥?nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?,用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁(yè)面”獲得更多應(yīng)用信息,如果您有興趣,可以和我們一起做一個(gè)“SmartStories”,也可以聯(lián)系我們。?對(duì)游離的N-聚糖的分析表明,SialEXO在溶液中完全脫唾液酸化。
在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截?cái)郞-聚糖后,在質(zhì)譜圖中觀察到幾個(gè)與GalNAcs相關(guān)的峰。為了去除剩余的GalNAc殘基,應(yīng)用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO處理后觀察到的單個(gè)蛋白峰顯示完全去除剩余的GalNAcs。?GalNAcEXO在生理緩沖液和中性pH值中具有活性,使其與大多數(shù)樣品相容。此外,GalNAcEXO的活性不依賴于任何可能影響LC-MS分析的輔因子,如BSA。根據(jù)底物的性質(zhì),糖蛋白的GalNAcEXO反應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)完成,而更復(fù)雜的樣品可能需要孵育過(guò)夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在離心柱中,以便快速方便地處理樣品,在制備過(guò)程中不會(huì)殘留酶。OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物可快速有效地去除抗體、融合蛋白;凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶
SialEXO 2-3唾液酸酶,對(duì) α2-3連接的唾液酸靶向水解。凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶
為了研究 OglyZOR 對(duì)天然糖蛋白的活性,將該酶與依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或沒(méi)有 SialEXO 孵育 1 小時(shí)。當(dāng)唾液酸被去除時(shí),OglyZOR酶有效地水解了所有三種底物中的O-聚糖。Genovis的OglyZOR 酶可有效水解天然糖蛋白中的he心 1 二糖 (Gal-β1,3-GalNAc)。這使得這些酶適合在LC-MS分析之前制備樣品,以鑒定其他PTM或確認(rèn)氨基酸序列O-糖基化生物制藥的全去糖基化:O-糖基化生物制藥(如依那西普)很難表征。為了能夠通過(guò)質(zhì)譜法測(cè)定完整質(zhì)量數(shù),我們進(jìn)行了酶促總?cè)ヌ腔?。N-聚糖被Genovis的PNGase F裂解,而O-聚糖可以與OglyZOR和SialEXO一起去除。。凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶