免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一種在生物藥物領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的技術(shù)，主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用。該技術(shù)通過(guò)利用特異性抗體將目標(biāo)蛋白與其相互作用的蛋白一同沉淀下來(lái)，從而揭示蛋白質(zhì)間的相互作用關(guān)系。在蛋白泛素化研究方面，Co-IP技術(shù)也發(fā)揮著重要作用。通過(guò)該技術(shù)，研究人員可以鑒定并驗(yàn)證與泛素連接酶和泛素受體相互作用的蛋白質(zhì)，進(jìn)一步揭示泛素化修飾的調(diào)控機(jī)制。同時(shí)，結(jié)合質(zhì)譜分析，Co-IP技術(shù)還可以鑒定泛素化修飾的靶標(biāo)蛋白質(zhì)及其相互作用蛋白質(zhì)，揭示泛素化修飾在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝調(diào)控等生命過(guò)程中的功能和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)應(yīng)用場(chǎng)景。廣西蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-MS檢測(cè)

CoIP實(shí)驗(yàn)免疫沉淀方法如下：

將25μL(0.25mg)的Pierce蛋白A/G的磁珠加入1.5mL離心管中。

向磁珠中加入175μL免疫沉淀裂解/漂洗緩沖液，輕微渦旋混勻。

將離心管放入磁力架中收集磁珠到離心管的一邊。去除上清。

向離心管中加入1mL免疫沉淀裂解/漂洗緩沖液。顛倒離心管數(shù)次或輕微渦旋混勻1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。

將抗原樣品/抗體混合物加入盛有磁珠的離心管中，保持混勻室溫下孵育1h。

用磁力架收集磁珠，除去未結(jié)合的樣品，保存以備分析。

向離心管中加入500μL免疫沉淀裂解/漂洗緩沖液，輕柔混勻。收集磁珠，棄上清。再重復(fù)洗兩次。

向管中加入500μL超純水，輕柔混勻。用磁力架收集磁珠，棄上清。

低pH洗脫：向離心管中加入100μL洗脫液。保持混勻在室溫下孵育離心管10min。通過(guò)磁力分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。每100μL洗出液中加入10μL中和液來(lái)中和低pH。備選洗脫方法：向離心管中加入100μL1X電泳上樣緩沖液，將樣品置于加熱器中，96-100℃加熱10min。通過(guò)磁力架分離磁珠，保留含有目的抗原的上清。

廣州基云生物，在IP互作組檢測(cè)和關(guān)鍵機(jī)制分子篩選驗(yàn)證領(lǐng)域，具有豐富的經(jīng)驗(yàn)，助力您的互作機(jī)制研究。 廣西蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-MS檢測(cè)CoIP實(shí)驗(yàn)內(nèi)源檢測(cè)與外源檢測(cè)的優(yōu)缺點(diǎn)。

Co-IP（免疫共沉淀）和ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）是兩種常用于研究蛋白質(zhì)與DNA或蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的實(shí)驗(yàn)方法。實(shí)驗(yàn)原理方面的區(qū)別：Co-IP利用抗體與抗原之間的特異性結(jié)合，將目標(biāo)蛋白及其與之相互作用的蛋白一起拉下來(lái)，進(jìn)而研究它們之間的相互作用。而ChIP則是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，并通過(guò)超聲或酶處理將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過(guò)抗原抗體的特異性識(shí)別反應(yīng)沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段。

Co-IP技術(shù)作為研究蛋白質(zhì)相互作用的重要手段，其結(jié)果在多數(shù)情況下是可靠的。然而，該技術(shù)也存在一些潛在的限制和影響因素，需要研究人員予以注意。在實(shí)際應(yīng)用中，由于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)種類繁多且相互作用復(fù)雜，可能會(huì)出現(xiàn)非特異性結(jié)合或背景噪聲，這要求研究者選擇特異性強(qiáng)的抗體，并通過(guò)洗滌步驟去除雜質(zhì)。此外，樣品的純度、抗體的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)條件等也會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響，因此，對(duì)抗體的選擇和驗(yàn)證、樣品的準(zhǔn)備以及實(shí)驗(yàn)條件的控制都至關(guān)重要。為了進(jìn)一步提高結(jié)果的準(zhǔn)確性，研究人員通常會(huì)結(jié)合多種方法進(jìn)行相互驗(yàn)證，如使用不同抗體或?qū)嶒?yàn)條件重復(fù)實(shí)驗(yàn)，或結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)來(lái)驗(yàn)證Co-IP的結(jié)果。這些措施共同增強(qiáng)了Co-IP技術(shù)結(jié)果的可靠性。免疫共沉淀強(qiáng)大但局限，需謹(jǐn)慎分析數(shù)據(jù)，避免冒險(xiǎn)性。

CoIP-Mass是一種檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白互作組的套餐技術(shù)。該技術(shù)通過(guò)聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)，對(duì)目的蛋白在特定細(xì)胞/組織內(nèi)的互作蛋白，進(jìn)行系統(tǒng)的檢測(cè)和分析。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細(xì)胞/組織中的蛋白互作組數(shù)據(jù)檢測(cè)，或用于不同遺傳背景/實(shí)驗(yàn)條件下的互作組差異研究。因此，該技術(shù)是研究細(xì)胞內(nèi)蛋白互作調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的常規(guī)前置技術(shù)。CoIP-WB是一種檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白互作的驗(yàn)證技術(shù)。該技術(shù)通過(guò)聯(lián)合免疫共沉淀技術(shù)和WesternBlot蛋白檢測(cè)技術(shù)，對(duì)目的蛋白在特定細(xì)胞/組織內(nèi)的互作關(guān)系進(jìn)行探究，明確蛋白直接的相互作用關(guān)系。該技術(shù)適用于目的蛋白在特定細(xì)胞/組織中的蛋白互作檢測(cè)驗(yàn)證，或用于不同遺傳背景/實(shí)驗(yàn)條件下的互作差異研究。因此，該技術(shù)是研究細(xì)胞內(nèi)蛋白互作調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的常規(guī)檢測(cè)技術(shù)。在CoIP（免疫共沉淀）實(shí)驗(yàn)對(duì)照組的設(shè)計(jì)。山西免疫沉淀CoIP-mass spectrometry檢測(cè)

Co-IP實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：溫和裂解、驗(yàn)證抗體、充分結(jié)合、沉降分離、洗脫純化，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠！廣西蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-MS檢測(cè)

結(jié)合了抗體的磁珠或樹脂（Beads）與樣本裂解液孵育，通過(guò)”抗原-抗體“之間的免疫作用，誘餌蛋白被吸附在Beads上，與此同時(shí)，誘餌蛋白的互作蛋白，也一起“共沉淀”到Beads上。洗滌去掉未結(jié)合的蛋白后，再用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物從Beads上洗脫下來(lái)，得到免疫共沉淀（Co-IP）產(chǎn)物。Co-IP產(chǎn)物既可以用WesternBlot檢測(cè)已知蛋白，也可以用質(zhì)譜鑒定未知蛋白。當(dāng)沒(méi)有合適的誘餌蛋白抗體時(shí)，還可以通過(guò)表達(dá)融合了Flag標(biāo)簽的誘餌蛋白，利用Flag標(biāo)簽抗體做免疫沉淀。即樣本過(guò)表達(dá)Flag-Bait，經(jīng)裂解后與anti-Flag珠子孵育，誘餌融合蛋白與Beads結(jié)合，其互作蛋白“共沉淀”到Beads上，再經(jīng)洗滌、洗脫后，用WB或質(zhì)譜檢測(cè)。廣西蛋白蛋白互作檢測(cè)CoIP-MS檢測(cè)