選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書,注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。新買來(lái)的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過(guò)膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過(guò)管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預(yù)冷。平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。超濾離心管還可用于制備DNA文庫(kù)或RNA文庫(kù),以進(jìn)行基因克隆和功能研究。北京濃縮超濾離心管品牌
脫鹽、更換緩沖液或滲濾是從含有生物分子的溶液中去除鹽分或溶劑的重要方法。鹽分去除或緩沖液更換可通過(guò)超濾管來(lái)完成,具體過(guò)程是濃縮樣本,棄去濾出液,然后向濃縮液中加入任何所需的溶劑,恢復(fù)到樣本原先的體積。"洗出"的過(guò)程可反復(fù)進(jìn)行,直到雜質(zhì)的濃度被充分降低。關(guān)于超濾管的常見問(wèn)題與解答:Q:超濾管的膜材質(zhì)是什么?A:超濾管的膜材質(zhì)為默克密理博特有的Ultracel再生纖維素膜,生產(chǎn)工藝嚴(yán)格,截留分子量明確而準(zhǔn), 蛋白吸附損失小。Q:如果要用超濾的方法分離兩種蛋白,那么這兩個(gè)蛋白的大小需要相差多少?A:按照經(jīng)驗(yàn),建議兩個(gè)蛋白的分子量要相差 一個(gè)數(shù)量級(jí)(10倍)。安徽濃縮超濾離心管廠家電話超濾離心管在藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究中也具有重要意義,以確定藥物代謝途徑和藥效學(xué)參數(shù)。
超濾離心管關(guān)于回收率的疑問(wèn)?一般對(duì)濃度大于0.1mg/ml的溶質(zhì)進(jìn)行回收,回收率在90%以上。通常,樣品損失是由于濾膜表面和料管表面的非特異性吸附造成的。為了獲得較高的回收率,所選濾膜的截留率約為目標(biāo)蛋白的1/3。超濾膜是一種非對(duì)稱膜,其孔徑呈正態(tài)分布。在高壓離心下也可能發(fā)生泄漏,在這種情況下蛋白質(zhì)可能會(huì)發(fā)生變形。因此,截留孔徑越小,流速越慢,但回收率會(huì)更高。濃縮過(guò)程中有蛋白質(zhì)沉淀,如何處理?如果蛋白質(zhì)濃縮過(guò)快或過(guò)多,都可能造成蛋白質(zhì)沉淀,濃縮后的蛋白質(zhì)之后濃度不宜過(guò)高;對(duì)于對(duì)濃縮速度敏感、易沉淀的蛋白質(zhì),建議改進(jìn)方法如下:1)降低離心速度,2)使用截留分子量較大的超濾膜3) 吹吸濃縮管,然后離心。
使用后用0.1M NaOH泡24h,然后20%乙醇浸泡保存。這個(gè)我是聽老板們說(shuō)的,的確乙醇泡完后孔徑會(huì)增大,基本就是5-10KD較大,也就是說(shuō)如果你的蛋白在21KD以上,應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題?;蛘呖梢圆挥靡掖寂?,用NaOH洗之后直接用無(wú)菌水保存,每周換一下液體,應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題??纯凑f(shuō)明書不就結(jié)了!我原來(lái)在CRO的時(shí)候一直是重復(fù)用的,也沒(méi)見什么不好啊!短期會(huì)用的話,用20%的乙醇泡著,回頭拼命用millipore的水充干凈,然后在用樣品緩沖液平衡一下就好,至于有些人說(shuō)的改變孔徑,也沒(méi)那么大影響的,你至少跟目的蛋白分子量差別3倍的截留分子量才安全的不是嗎?1個(gè)月以內(nèi)不用的話,建議用100mM的NaOH保存!更長(zhǎng)時(shí)間的話加0.02%的疊氮鈉,但那個(gè)東西強(qiáng)致疾病物,不建議使用。理論上截留目標(biāo)物,孔徑應(yīng)選1/3~1/5的膜;透過(guò)目標(biāo)物,孔徑應(yīng)選5-10倍的膜。超濾離心管也可用于從血漿或尿液中提取蛋白質(zhì)和核酸等大分子化合物。
超濾離心管是否可以重復(fù)使用:離心超濾管通常不能消毒再次性使用。由于單管價(jià)格并不便宜,不少人嘗試重復(fù)使用----經(jīng)驗(yàn)是用蒸餾水清洗膜表面多次,離心一次到兩次,那種可以反向離心的小管子可以加蒸餾水浸泡后反向多離心一次,會(huì)好些??芍貜?fù)用于同一樣品,不用時(shí)可用蒸餾水浸泡,但是要防止細(xì)菌污染。不同樣品就不要混用了。有人說(shuō)泡在20%酒精、1N的NaOH(氫氧化鈉)中,防止長(zhǎng)菌,而且防干,只要超濾膜侵了水,就不可以再讓它干,但也有人說(shuō)會(huì)破壞膜結(jié)構(gòu)。反正廠家一般不支持重復(fù)用。多次重復(fù)使用會(huì)堵塞濾膜上的孔徑,甚至出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。超濾離心管可根據(jù)不同孔徑大小選擇超濾膜,以便過(guò)濾出所需大小范圍內(nèi)的目標(biāo)分子。遼寧30K超濾離心管廠家有哪些
超濾離心管是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室必不可少的設(shè)備之一,為科研工作者提供了便利和支持。北京濃縮超濾離心管品牌
超濾離心管應(yīng)用:1、組成部分:該裝置包括一個(gè)蓋子、一個(gè)過(guò)濾器和一個(gè)50ML的離心管。2、帶有擺桶式或定角式轉(zhuǎn)子的離心器以及可以容納50mL試管的樣本腔/試管座。①注意:為了避免在離心過(guò)程中損壞裝置,在旋轉(zhuǎn)前請(qǐng)檢查間隙。 3、帶有200微升(μL)的移液管,用于濃縮液回收適用性。①注意:該產(chǎn)品未經(jīng)消毒,只供一次使用,保質(zhì)期3年。為確保對(duì)預(yù)定用途的適用性,建議進(jìn)行初步的回收和截留試驗(yàn)。4、濃縮含有抗原、抗體、酶、核酸(單株或雙株DNA/RNA樣本)、微生物、洗出液和凈化樣本的生物樣本。5、凈化組織培養(yǎng)基提取液和細(xì)胞溶解液中的大分子成分,從反應(yīng)混合液中去除引物、連接或分子標(biāo)記,在HPLC之前去除蛋白質(zhì)。北京濃縮超濾離心管品牌