超濾作為一種膜分離技術(shù),普遍應(yīng)用于生物樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換,其原理是溶液在力的作用下,通過(guò)超濾膜孔徑的篩濾,大分子量的顆粒被截留下來(lái),而水、溶劑和低分子量溶質(zhì)則允許透過(guò)膜,從而達(dá)到濃縮、脫鹽和緩沖液置換的目的,這種方法較大的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、快速、高效,可同時(shí)濃縮和純化分子。如何使用超濾心離心管?1. 使用角轉(zhuǎn)子加到超濾裝置上,較大樣本量為15 毫升(Anavo Ultra-15)。2. 將帶蓋過(guò)濾裝置放入離心機(jī)轉(zhuǎn)子內(nèi); 用一個(gè)類似的裝置來(lái)平衡。3. 使用定角轉(zhuǎn)子時(shí),將薄膜面板朝上定位,較大旋轉(zhuǎn) 5000 xg,旋轉(zhuǎn) 30 分鐘。4. 為了回收濃縮的溶質(zhì),在過(guò)濾裝置的底部插入一個(gè)移液管,通過(guò)左右掃動(dòng)的方式將樣品抽離,以保證總回收率。超濾液可貯存在離心管中。說(shuō)明:為達(dá)到較佳回收率,離心后應(yīng)立即取出濃縮樣品。超濾離心管還可用于藥代動(dòng)力學(xué)和藥物分析中,以確定藥物代謝和藥效學(xué)參數(shù)。溫州高離心力離心管
超濾離心管只需5到15分鐘,即可對(duì)50到500L樣本進(jìn)行簡(jiǎn)便、可靠的濃縮與脫鹽處理:快速處理樣本。通常,回收率高于90%;備有低蛋白質(zhì)結(jié)合的Omega、Bio-Inert或GHP濾膜可供選擇。對(duì)應(yīng)各種截留分子量,備有各種編碼以供輕松識(shí)別的顏色可供選擇。結(jié)構(gòu)材料為低結(jié)合聚丙烯。超聲焊接密封,防止側(cè)流或密封不嚴(yán)。適用于配合1.5mL試管的標(biāo)準(zhǔn)離心轉(zhuǎn)子。超濾離心管通常不需要預(yù)處理即可使用,不過(guò)對(duì)于蛋白質(zhì)樣本處理,特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來(lái)說(shuō)(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附較小化,但是,某些蛋白,特別是稀的時(shí)候,會(huì)有問(wèn)題。非特異結(jié)合的程度隨著個(gè)別蛋白結(jié)構(gòu)的不同而不同。江蘇100K超濾離心管在哪買超濾離心管可以通過(guò)調(diào)整旋轉(zhuǎn)速度、溫度等參數(shù)來(lái)控制分子篩選效果。
超濾離心管,備有四種材質(zhì)的超濾膜:聚醚砜、三醋酸纖維素、再生纖維素和Hydrosart,可根據(jù)不同要求靈活選用。 使用注意事項(xiàng) (1)選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說(shuō)明書,注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。 (2)新買來(lái)的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過(guò)膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過(guò)管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預(yù)冷。 (3)平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開(kāi)始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后,有所不同。離心機(jī)的加速度調(diào)至較低檔,減小對(duì)膜的壓力。
超濾離心管從細(xì)胞培養(yǎng)上清液中濃縮蛋白,在園子里找到一些關(guān)于濃縮蛋白的一些帖子,但還有些問(wèn)題還是向園子里的大蝦請(qǐng)教一下。我們定的是 15ml規(guī)格的管子,不知道有沒(méi)有誰(shuí)以前做過(guò)的,有關(guān)于轉(zhuǎn)速,時(shí)間給一些建議,另外細(xì)胞上清液離心前是否需要什么預(yù)處理?離心之后回收蛋白時(shí)怎么盡量減少損失?如果要把管子重復(fù)利用,NaoH清洗后,如何在20%的乙醇中保存?是將其浸到乙醇中防于4度,還是在管子中灌入乙醇?我用過(guò)5ml的管子,當(dāng)時(shí)使用的轉(zhuǎn)速是4000rpm 8min,可以把5ml的樣品液濃縮到約200ul,這只供參考,具體情況還要由您的樣品決定。我保存5ml管子的方法是把內(nèi)管取出,浸泡于裝有20%乙醇的燒杯中。四度保存。超濾離心管通常被用于天然藥物研究和制備中。
超濾離心管是否可以重復(fù)使用:離心超濾管通常不能消毒再次性使用。由于單管價(jià)格并不便宜,不少人嘗試重復(fù)使用----經(jīng)驗(yàn)是用蒸餾水清洗膜表面多次,離心一次到兩次,那種可以反向離心的小管子可以加蒸餾水浸泡后反向多離心一次,會(huì)好些??芍貜?fù)用于同一樣品,不用時(shí)可用蒸餾水浸泡,但是要防止細(xì)菌污染。不同樣品就不要混用了。有人說(shuō)泡在20%酒精、1N的NaOH(氫氧化鈉)中,防止長(zhǎng)菌,而且防干,只要超濾膜侵了水,就不可以再讓它干,但也有人說(shuō)會(huì)破壞膜結(jié)構(gòu)。反正廠家一般不支持重復(fù)用。多次重復(fù)使用會(huì)堵塞濾膜上的孔徑,甚至出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。使用超濾離心管時(shí)應(yīng)注意避免過(guò)度壓力造成膜破裂或損壞并影響分離效果。寧波高離心力離心管購(gòu)買
超濾離心管適用于小到大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室操作,并可進(jìn)行批量處理以提高效率。溫州高離心力離心管
注意:超濾離心管中的濾膜一旦潤(rùn)濕 后應(yīng)避免變干。如果在預(yù)清洗后不是立即使用,則讓液體保留在濾膜上,直到使用。6.使用方法:1).將超濾內(nèi)管插入所提供的一個(gè)微量離心管中。2).向超濾管內(nèi)管中加入不超過(guò)500 μL的樣本,并蓋上蓋子。3).將蓋好蓋子的超濾管放入離心轉(zhuǎn)子中,讓蓋子的連接帶朝著轉(zhuǎn)子的中間;用一個(gè)類似的超濾管平衡。4).以14,000 x g離心約10-30分鐘,具體時(shí)間取決于所使用超濾管的NMWL。5).離心結(jié)束后將整個(gè)超濾管從離心機(jī)中取出,取出內(nèi)管。6).為了回收濃縮后的溶質(zhì),將內(nèi)管倒過(guò)來(lái)插在-個(gè)干凈的微量離心管中。放在離心機(jī)中,讓打開(kāi)的蓋子朝著轉(zhuǎn)子的中間;用一個(gè)類似的超濾管進(jìn)行平衡。以1 ,000 x g離心2分鐘,使?jié)饪s后的樣本從超濾內(nèi)管轉(zhuǎn)移到收集管中。超濾液可以保存在收集管中。溫州高離心力離心管