超濾離心管的常見問題與解答,一:超濾離心管的膜材質(zhì)是什么?超濾離心管的膜材質(zhì)為特有的Ultracel再生纖維素膜,生產(chǎn)工藝嚴(yán)格,截留分子量明確而,蛋白吸附損失較小。二:如果要用超濾離心管的方法分離兩種蛋白,那么這兩個(gè)蛋白的大小需要相差多少?按照經(jīng)驗(yàn),建議兩個(gè)蛋白的分子量要相差一個(gè)數(shù)量級(jí)(10倍)。不保證超濾離心管不包含RNA酶,建議用0.1%DEPC在37度浸泡2小時(shí),以完全滅活RNA酶;殘留的DEPC可以用Milli-Q超純水洗滌除去。去污劑因其獨(dú)特的性質(zhì),當(dāng)濃度大于臨界微團(tuán)濃度(Critical Micelle Concentration、CMC)時(shí),去污劑分子會(huì)聚集形成微團(tuán)而改變分子構(gòu)象,這有可能會(huì)影響去污劑的去除效果,具體的操作步驟請(qǐng)垂詢我們。超濾離心管還可用于生產(chǎn)工藝控制和質(zhì)量監(jiān)測(cè),以確保產(chǎn)品符合標(biāo)準(zhǔn)要求。江蘇濃縮超濾離心管生產(chǎn)公司
一般來說,我們較常用的離心管就是塑料離心管,塑料離心管的優(yōu)缺點(diǎn)也很明顯,優(yōu)點(diǎn)是它的硬度較小,可以利用穿刺法來得到我們需要的物質(zhì)。但這也正是它的缺點(diǎn),因?yàn)橛捕刃?,所以它也更容易變形,抗腐蝕性也差,所以它的壽命是比較短的。塑料離心管的還可以按照材質(zhì)來選擇,分別有聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)這三種材質(zhì)。一般大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室都是將塑料離心管做一次性使用,但一般的實(shí)驗(yàn)室還是會(huì)循環(huán)使用,不推薦循環(huán)使用,因?yàn)檫@樣會(huì)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不準(zhǔn)確性,但如果非要做循環(huán)使用的話小編還是建議使用pp材質(zhì)的離心管,然后經(jīng)過高壓高溫進(jìn)行消毒,pp材質(zhì)是上述三種材質(zhì)中較好的,所以在選擇的時(shí)候我們盡量選擇pp材質(zhì)的離心管。廣東3K超濾離心管生產(chǎn)廠超濾離心管可以通過調(diào)整旋轉(zhuǎn)速度、溫度等參數(shù)來控制分子篩選效果。
選擇合適的超濾管。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說明書,注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同。新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,即可加入蛋白液,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn)。操作要輕,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預(yù)冷。平衡。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。
離心管主要有塑料、不銹鋼制成,塑料離心管常用資料有聚丙烯(PP).聚乙烯(PE),聚碳酸酯(PC)等。其中PP管性能較好,塑料離心管的優(yōu)點(diǎn)是透明(或半透明),硬度小,可用穿刺法取出梯度,缺陷是易變形,抗有機(jī)溶劑腐蝕性差,運(yùn)用壽命短;不銹鋼離心管強(qiáng)度大,不變形,能抗凍,抗熱,抗化學(xué)腐蝕,但用時(shí)要防止接觸強(qiáng)腐蝕性的化學(xué)藥品、如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等化學(xué)試劑。這里主要介紹塑料離心管:塑料離心管都有管蓋,離心前管蓋必需蓋嚴(yán),倒置不漏液。管蓋有三種作用:①避免樣品外泄,用于有放射性或強(qiáng)腐蝕性的樣品時(shí)②避免樣品揮發(fā)③支持離心管,避免離心管變形。超濾離心管通常需要在低溫條件下進(jìn)行操作,以避免目標(biāo)分子被破壞或失活。
超濾作為一種膜分離技術(shù),普遍應(yīng)用于生物樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換,其原理是樣本在力的作用下,通過超濾膜孔徑的篩濾,大分子量的顆粒被截留下來,而水、溶劑和低分子量溶質(zhì)則允許透過膜,從而達(dá)到濃縮、脫鹽和緩沖液置換的目的,這種方法較大的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、快速、高效,可同時(shí)濃縮和純化分子,一般來說超濾的回收率能夠達(dá)到90%以上,因此得到許多人的青睞。一種超濾離心管,包括主管,主管為頂部開口底部封閉結(jié)構(gòu),主管開口處安裝有頂蓋,主管內(nèi)安裝有內(nèi)管,內(nèi)管上下貫通,內(nèi)管底面貼合有超濾膜,超濾膜將內(nèi)管底面包覆,超濾膜底面貼合有支撐板,超濾膜位于內(nèi)管底面與支撐板之間,內(nèi)管底部安裝有底托,內(nèi)管配合底托將超濾膜、支撐板壓緊,內(nèi)管、超濾膜、支撐板、底托與主管中位于底托以下的容腔空間連通。超濾離心管適用于從細(xì)胞培養(yǎng)基、血漿、尿液等樣品中分離蛋白質(zhì)、核酸、多糖等大分子化合物。江蘇濃縮超濾離心管生產(chǎn)公司
使用前應(yīng)先對(duì)超濾膜進(jìn)行濕潤化處理,以免損壞其結(jié)構(gòu)并保證較佳效果。江蘇濃縮超濾離心管生產(chǎn)公司
超濾離心管使用的是再生纖維素膜,這種材質(zhì)是蛋白吸附較低的超濾膜。但是對(duì)于一些疏水性蛋白或非極性蛋白,它們和膜的非特異吸附可能會(huì)增強(qiáng),對(duì)于這種情況,可以嘗試在實(shí)驗(yàn)前對(duì)超濾管進(jìn)行封閉處理,也可以嘗試換成Amicon Ultra0.5或2來進(jìn)行實(shí)驗(yàn),通過減小膜面積來降低非特異性吸附。超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析,可用緩沖液或Milli-Q水預(yù)清洗。如果干擾仍存在,用0.1N NaOH清洗,然后用緩沖液或Milli-Q水再次清洗后甩干。江蘇濃縮超濾離心管生產(chǎn)公司