實(shí)驗(yàn)室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用得較多,因?yàn)椴AУ碾x心管不能用在高速或者超速離心機(jī)上。塑料的離心管又有PC (聚碳酸酯)、PE (聚乙烯)、PP(聚丙烯)等材質(zhì)。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀地看到樣品的離心情況,但是比較容易變形,抗有機(jī)溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實(shí)驗(yàn)室一般會經(jīng)常購買離心管。PC (聚碳酸酯):透明度較好,硬度大,可以高溫消毒,但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿以及一些有機(jī)溶劑如酒精之類。主要用于5萬轉(zhuǎn)以上的超高速離心。PE(聚乙烯):不透明。和丙銅、醋酸、鹽酸等不反應(yīng),較為穩(wěn)定,高溫下容易變軟。PP(聚丙烯):半透明,化學(xué)及溫度穩(wěn)定性較好,但是在低溫下會變脆,所以在離心時(shí)不要在4℃以下。超濾離心管可以根據(jù)不同孔徑大小選擇超濾膜,以便過濾出所需大小范圍內(nèi)的目標(biāo)分子。浙江小型超濾離心管哪里能買
超濾離心管使用的是再生纖維素膜,這種材質(zhì)是蛋白吸附較低的超濾膜。但是對于一些疏水性蛋白或非極性蛋白,它們和膜的非特異吸附可能會增強(qiáng),對于這種情況,可以嘗試在實(shí)驗(yàn)前對超濾管進(jìn)行封閉處理,也可以嘗試換成Amicon Ultra0.5或2來進(jìn)行實(shí)驗(yàn),通過減小膜面積來降低非特異性吸附。超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析,可用緩沖液或Milli-Q水預(yù)清洗。如果干擾仍存在,用0.1N NaOH清洗,然后用緩沖液或Milli-Q水再次清洗后甩干。浙江小型超濾離心管哪里能買超濾離心管是一種經(jīng)濟(jì)、有效且環(huán)保的分離技術(shù),具有普遍應(yīng)用前景。
超濾離心管的常見問題與解答,一:超濾離心管的膜材質(zhì)是什么?超濾離心管的膜材質(zhì)為特有的Ultracel再生纖維素膜,生產(chǎn)工藝嚴(yán)格,截留分子量明確而,蛋白吸附損失較小。二:如果要用超濾離心管的方法分離兩種蛋白,那么這兩個(gè)蛋白的大小需要相差多少?按照經(jīng)驗(yàn),建議兩個(gè)蛋白的分子量要相差一個(gè)數(shù)量級(10倍)。不保證超濾離心管不包含RNA酶,建議用0.1%DEPC在37度浸泡2小時(shí),以完全滅活RNA酶;殘留的DEPC可以用Milli-Q超純水洗滌除去。去污劑因其獨(dú)特的性質(zhì),當(dāng)濃度大于臨界微團(tuán)濃度(Critical Micelle Concentration、CMC)時(shí),去污劑分子會聚集形成微團(tuán)而改變分子構(gòu)象,這有可能會影響去污劑的去除效果,具體的操作步驟請垂詢我們。
離心過濾器具有快速超過濾功能,能夠達(dá)到較高的濃縮系數(shù),易于從稀釋液和復(fù)雜的樣本組合進(jìn)行濃縮液回收。其豎式設(shè)計(jì)以及可用的濾膜表面積能提供快速的樣本處理和較高的樣本回收率(通常大于90%稀薄的初始溶液),并能進(jìn)行80倍濃縮。典型的處理時(shí)間為15至60分鐘,這取決于標(biāo)稱分子量限值(NMWL)。豎式設(shè)計(jì)將溶質(zhì)極化和之后造成的濾膜結(jié)垢降至較低,過濾裝置中的物理止濾點(diǎn)防止過濾器旋轉(zhuǎn)過度使樣本干燥和造成樣本損失。濃縮液用移液管從過濾器的樣本槽中收集,而超過濾濾出液則收集到所提供的離心管中。該裝置可在擺桶或定角轉(zhuǎn)子中旋轉(zhuǎn)。裝置未經(jīng)消毒,只供—次使用。超濾離心管通常具有不同材質(zhì)的選擇,以適應(yīng)不同化學(xué)環(huán)境下的使用需求。
超濾離心管的分子量選擇:按照樣品量和目標(biāo)分子量選擇適當(dāng)?shù)某瑸V離心管,為了得到較高的收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過目標(biāo)分子量的一半。因?yàn)槌瑸V膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的超濾管多次重復(fù)加樣離心。如果同時(shí)需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),可將待濃縮樣品稀釋到超濾管較大容積再離心,重復(fù)2次可除去99%鹽。避免過長時(shí)間或者過速離心,雖然優(yōu)良品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計(jì),可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過度濃縮,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時(shí)補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。超濾離心管通常需要冷藏保存,以保持其性能和壽命。浙江小型超濾離心管哪里能買
超濾離心管在臨床診斷中也具有重要作用,如腎功能檢測、腦脊液分析等領(lǐng)域。浙江小型超濾離心管哪里能買
我用的是3500g,4度離心,時(shí)間可以自己控制,取決于你之后的濃縮體積,我一般是200ul左右。千萬別一下離心時(shí)間太長,不同的蛋白濃縮的速度不同,有的需要長時(shí)間離心,有的則一下子就好。當(dāng)然也和你的蛋白是否比較純,所用的是什么buffer,還有蛋白的濃度有關(guān)系。所以離心時(shí)要先短些時(shí)間觀察一下你的濃縮速度,不要一下子濃縮過了,甚至形成沉淀就得不償失了。另外其實(shí)他們的管子都設(shè)計(jì)的是一次性使用,所以如果想重復(fù)使用,不要離得速度太高,4000-4500RPM就差不多了,另外重復(fù)使用時(shí)要看看管壁上有沒有裂紋,現(xiàn)在的管子好像不如從前的結(jié)實(shí)了。浙江小型超濾離心管哪里能買