實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用得較多,因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機(jī)上。塑料的離心管又有PC (聚碳酸酯)、PE (聚乙烯)、PP(聚丙烯)等材質(zhì)。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,可以直觀地看到樣品的離心情況,但是比較容易變形,抗有機(jī)溶劑的腐蝕性較差,所以使用壽命較短。因此,實驗室一般會經(jīng)常購買離心管。PC (聚碳酸酯):透明度較好,硬度大,可以高溫消毒,但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿以及一些有機(jī)溶劑如酒精之類。主要用于5萬轉(zhuǎn)以上的超高速離心。PE(聚乙烯):不透明。和丙銅、醋酸、鹽酸等不反應(yīng),較為穩(wěn)定,高溫下容易變軟。PP(聚丙烯):半透明,化學(xué)及溫度穩(wěn)定性較好,但是在低溫下會變脆,所以在離心時不要在4℃以下。超濾離心管可以根據(jù)不同孔徑大小選擇超濾膜,以便過濾出所需大小范圍內(nèi)的目標(biāo)分子。浙江小型超濾離心管哪里能買
超濾離心管使用的是再生纖維素膜,這種材質(zhì)是蛋白吸附較低的超濾膜。但是對于一些疏水性蛋白或非極性蛋白,它們和膜的非特異吸附可能會增強(qiáng),對于這種情況,可以嘗試在實驗前對超濾管進(jìn)行封閉處理,也可以嘗試換成Amicon Ultra0.5或2來進(jìn)行實驗,通過減小膜面積來降低非特異性吸附。超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析,可用緩沖液或Milli-Q水預(yù)清洗。如果干擾仍存在,用0.1N NaOH清洗,然后用緩沖液或Milli-Q水再次清洗后甩干。浙江小型超濾離心管哪里能買超濾離心管是一種經(jīng)濟(jì)、有效且環(huán)保的分離技術(shù),具有普遍應(yīng)用前景。
超濾離心管的常見問題與解答,一:超濾離心管的膜材質(zhì)是什么?超濾離心管的膜材質(zhì)為特有的Ultracel再生纖維素膜,生產(chǎn)工藝嚴(yán)格,截留分子量明確而,蛋白吸附損失較小。二:如果要用超濾離心管的方法分離兩種蛋白,那么這兩個蛋白的大小需要相差多少?按照經(jīng)驗,建議兩個蛋白的分子量要相差一個數(shù)量級(10倍)。不保證超濾離心管不包含RNA酶,建議用0.1%DEPC在37度浸泡2小時,以完全滅活RNA酶;殘留的DEPC可以用Milli-Q超純水洗滌除去。去污劑因其獨特的性質(zhì),當(dāng)濃度大于臨界微團(tuán)濃度(Critical Micelle Concentration、CMC)時,去污劑分子會聚集形成微團(tuán)而改變分子構(gòu)象,這有可能會影響去污劑的去除效果,具體的操作步驟請垂詢我們。
離心過濾器具有快速超過濾功能,能夠達(dá)到較高的濃縮系數(shù),易于從稀釋液和復(fù)雜的樣本組合進(jìn)行濃縮液回收。其豎式設(shè)計以及可用的濾膜表面積能提供快速的樣本處理和較高的樣本回收率(通常大于90%稀薄的初始溶液),并能進(jìn)行80倍濃縮。典型的處理時間為15至60分鐘,這取決于標(biāo)稱分子量限值(NMWL)。豎式設(shè)計將溶質(zhì)極化和之后造成的濾膜結(jié)垢降至較低,過濾裝置中的物理止濾點防止過濾器旋轉(zhuǎn)過度使樣本干燥和造成樣本損失。濃縮液用移液管從過濾器的樣本槽中收集,而超過濾濾出液則收集到所提供的離心管中。該裝置可在擺桶或定角轉(zhuǎn)子中旋轉(zhuǎn)。裝置未經(jīng)消毒,只供—次使用。超濾離心管通常具有不同材質(zhì)的選擇,以適應(yīng)不同化學(xué)環(huán)境下的使用需求。
超濾離心管的分子量選擇:按照樣品量和目標(biāo)分子量選擇適當(dāng)?shù)某瑸V離心管,為了得到較高的收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過目標(biāo)分子量的一半。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的超濾管多次重復(fù)加樣離心。如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),可將待濃縮樣品稀釋到超濾管較大容積再離心,重復(fù)2次可除去99%鹽。避免過長時間或者過速離心,雖然優(yōu)良品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過度濃縮,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。超濾離心管通常需要冷藏保存,以保持其性能和壽命。浙江小型超濾離心管哪里能買
超濾離心管在臨床診斷中也具有重要作用,如腎功能檢測、腦脊液分析等領(lǐng)域。浙江小型超濾離心管哪里能買
我用的是3500g,4度離心,時間可以自己控制,取決于你之后的濃縮體積,我一般是200ul左右。千萬別一下離心時間太長,不同的蛋白濃縮的速度不同,有的需要長時間離心,有的則一下子就好。當(dāng)然也和你的蛋白是否比較純,所用的是什么buffer,還有蛋白的濃度有關(guān)系。所以離心時要先短些時間觀察一下你的濃縮速度,不要一下子濃縮過了,甚至形成沉淀就得不償失了。另外其實他們的管子都設(shè)計的是一次性使用,所以如果想重復(fù)使用,不要離得速度太高,4000-4500RPM就差不多了,另外重復(fù)使用時要看看管壁上有沒有裂紋,現(xiàn)在的管子好像不如從前的結(jié)實了。浙江小型超濾離心管哪里能買