為何血清會存在批間差?如何避免此影響?因為血清來源于動物,其組成成分有1000種左右,每個批號的組分和組分含量都是不固定的,因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對細胞的影響,XP建議先進行批號測試,篩選合適的批號,備好庫存(血清未開封時,在-20℃下可保存5年)。如需更換血清批次或產(chǎn)地,建議先試用后再大量訂購。血清中沉淀是什么成分?造成原因有哪些?如何預防和處理沉淀?血清中沉淀主要有:纖維蛋白(絮狀沉淀),甲胎蛋白,脂蛋白,冷凝集素,玻粘連蛋白,磷酸鈣[1](顯微鏡下小黑點沉淀),膽固醇等。原因:造成沉淀的主要原因是溫度的改變。熱滅活,反復凍融,長期儲存于2-8℃或者室溫。預防措施與建議:因此不立即使用的血清應保存在-20℃或以下。大量未參加凝血反應的物質(zhì)則與血漿基本相同。黃石無外泌體胎牛血清供應商
多數(shù)細胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下,熱滅活并不會改善細胞的生長,卻降低了支持細胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進的情況下,其促進的比率也是微不足道的。另外,血清的熱滅活導致的沉淀常常被認為是微生物的污染,從而給用戶和供應商都帶來不必要的麻煩。所以胎牛血清不推薦熱滅活。熱滅活一般是指在做免疫相關的試驗中,通過加熱滅活掉血清中的補體,以避免對免疫試驗的影響。在胎牛血清中,由于胎齡原因,尚未形成完整的補體系統(tǒng),因此,胎牛血清不會真正干預免疫試驗。故不需滅活。并且,熱滅活反而可能導致胎牛血清中部分重要的生長因子的活性衰減,進而影響細胞培養(yǎng)效果。珠海標準級血清供應商使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。
細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關:細胞生長過老,破碎的細胞殘??;血清質(zhì)量不好,反復凍融的結(jié)果;配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細胞生長;配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。
血清的常見問題:保存方法,血清應保存在-5℃至-20℃。然而,若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議將無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。解凍方法:將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。避免產(chǎn)生沉淀物:解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制仍不清楚。
很好的胎牛血清對細胞成長的作用:提供細胞生長所需的天然或天然的生長因子。提供天然的結(jié)合蛋白,能識別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和等,能結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的活性。已知清蛋白即具有上述功能,并對細胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。又如胎牛血清中富含胎球蛋白,具有多個鈣離子結(jié)合位點,因而能調(diào)節(jié)和維持血清中的鈣離子濃度。天然含有粘附蛋白等細胞外基質(zhì)成分,促進細胞的附著、鋪展。提供醫(yī)治功能。這主要通過血清中的某些蛋白與有毒的金屬離子結(jié)合來完成的。如金屬硫蛋白,對多種重金屬有高度親和性,并可消除細胞生長環(huán)境中的氧自由基,具有很強的抗氧化活性,可防止細胞衰老。提供酸堿度緩沖的作用,以及維持滲透壓。提供蛋白酶抑制劑,使細胞免受蛋白酶的損傷。因此在細胞消化時,常用含血清的培養(yǎng)液終止胰酶對細胞的作用。血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。寧波細胞培養(yǎng)用胎牛血清品牌
經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會明顯增多。黃石無外泌體胎牛血清供應商
非正規(guī)胎牛血清的產(chǎn)品會存在很多的問題:疫區(qū)來源,無合格質(zhì)檢使胎牛血清存在生物學污染:支原體、噬菌體、病毒、原蟲等,會直接影響實驗的結(jié)果和穩(wěn)定。工藝不規(guī)范,導致采集的原血放置時間過長或操作不當導致溶血,血液中血細胞裂解,血清顏色呈紅色或暗紅色,這樣的血清含有許多胞內(nèi)產(chǎn)物,里面很多物質(zhì)都會對細胞有刺激作用,影響實驗的穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)的真實性。血清批次不穩(wěn)定,添加來補?很多不法商販拿到低廉的疫區(qū)原料血清進行加工生產(chǎn),為了保障血清的培養(yǎng)效果會對血清進行處理,較為常見的是添加、轉(zhuǎn)鐵蛋白、BSA、生長因子等,還有的會和新生牛血清、培養(yǎng)基等勾兌,更有甚者用的根本就不是牛血清,此類操作對所有生物學實驗都有巨大的影響。黃石無外泌體胎牛血清供應商