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莆田藥理學膜片鉗電生理技術技術

來源: 發(fā)布時間:2023-01-28

膜片鉗使用的注意事項:1.為了防止塵埃、靜電傷害機器,每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時,請先用砂紙輕微打磨,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,如果銀絲電極30min未變黑,則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器,后開軟件;先關軟件,后關放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源,打開后至少需1個小時才可關閉。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲(包括地線),在取放細胞片時請關閉放大器。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數量級,因此封接范圍內細胞膜光有少數離子通道。膜片鉗使用的注意事項:為了防止塵埃、靜電傷害機器,每天做實驗前請用清水拖地。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標:外灌流時間常數:~200ms;內灌流時間常數:~2s。莆田藥理學膜片鉗電生理技術技術

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膜片鉗實驗中電極制備的要求:合格的膜片微電極是成功封接細胞膜的基本條件。要成功的封接細胞膜需要兩方面的因素保證,一是設法造成干凈的細胞膜表面,二是制成合格的電極。首先要選擇適當的玻璃毛細管,其材料可使用軟質玻璃(蘇打玻璃、電石玻璃)或硬質玻璃(硼硅玻璃、鋁硅玻璃、石英玻璃)。軟玻璃電極常用于作全細胞記錄,硬質玻璃因導電率低、噪聲小而常用于離子單通道記錄。膜片微電極是將玻璃毛細管用電極拉制儀拉制而成的,制作分三步進行:一是分兩次拉制;第二步是在電極前端涂以硅酮樹脂(sylgard);第三步是拋光。合肥細胞生物學腦片膜片鉗設計公司為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響,通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。

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膜片鉗操作實驗:標本制備根據研究目的的不同,可采用不同的細胞組織,如心肌細胞、平滑肌細胞、細胞等,現在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞,必須滿足實驗要求,一般多采用酶解分離法,也可采用細胞培養(yǎng)法;另外,由于與分子生物學技術的結合,現在也運用分子克隆技術表達不同的離子通道,如利用非洲爪蟾卵母細胞表達外源性基因等。電極在實驗前要灌注電極液,由于電極較細,因此在充灌前,電極內液要用0.2 μm的濾膜進行過濾。一般電極充灌可分灌尖(tipfilling)和后充兩步灌尖時將電極浸入內液中5s即可。

膜片鉗電生理技術服務:膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術。些技術的出現自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯系在一起,同時又將神經科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯系、互不滲透,阻礙人們很全認識能力的弊端。由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內開放所產生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術的基本原理是通過負反饋使得膜電位與指令電壓相等,在電壓鉗制的條件下記錄膜電流。膜片鉗使用操作注意:不得在本機電腦下載別的軟件,拷數據時需用實驗室配置的U盤。

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膜片鉗電生理技術的樣本種類:從較早的肌細胞、神經元和內分泌細胞發(fā)展到血細胞、肝細胞、耳蝸毛細胞、胃壁細胞、上皮細胞、內皮細胞、免疫細胞、精母細胞等多種細胞;從急性分散細胞和培養(yǎng)細胞發(fā)展到組織片乃至整體動物;從蝸牛、青蛙、蠑螈、爪蟾母細胞發(fā)展到雞細胞、大鼠細胞、人細胞等;從動物細胞發(fā)展到細菌及植物細胞。此外,膜片鉗技術還普遍地應用到平面雙分子層(planarbilayer)、脂質體(liposome)等人工標本上。研究對象:從對離子通道(配體門控性離子通道、電壓門控性離子通道、第二信使介導的離子通道、機械敏感性離子通道及縫隙連接通道等)的研究發(fā)展到對離子泵、交換體及可興奮細胞的胞吞、胞吐機制的研究等。膜片鉗電極已不單單是傳統(tǒng)意義上的電信號記錄電極,它還可作為其他研究方法的工具使用,如用于進行單細胞PCR技術時的細胞內容物抽吸。膜片鉗的應用:與藥物作用有關的心肌離子通道。連云港藥理學膜片鉗技術網站

膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數目不同。莆田藥理學膜片鉗電生理技術技術

一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響,通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如,需要檢驗某種是否對某種離子通道的影響,則需要在細胞封接后記錄電流數據,然后通過在細胞周圍快速給藥再次記錄電流數據即可對比數據判斷該對離子通道的影響。以往多采用橡皮泥等簡單設備固定灌流管進行實驗,經常出現灌流管固定不良影響實驗的情況,也有精密的灌流裝置,但是結構復雜,且成本非常高。膜片鉗技術是在電壓鉗技術基礎上發(fā)展起來的。莆田藥理學膜片鉗電生理技術技術

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