膜片鉗在通道研究中的重要作用:應(yīng)用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開(kāi)閉時(shí)程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時(shí)可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,并能在記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計(jì)算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開(kāi)放概率,還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物質(zhì)對(duì)離子通道開(kāi)閉及通道電流的影響等。同時(shí)用于研究細(xì)胞信號(hào)的跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞分泌機(jī)制。結(jié)合分子克隆和定點(diǎn)突變技術(shù),膜片鉗技術(shù)可用于離子通道分子結(jié)構(gòu)與生物學(xué)功能關(guān)系的研究。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。南通全自動(dòng)膜片鉗全細(xì)胞記錄哪家好
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對(duì)相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它的基本原理是以一個(gè)光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細(xì)胞的膜接觸,之后對(duì)微電極另一端開(kāi)口處施加適當(dāng)?shù)呢?fù)壓用電極的纖細(xì)開(kāi)口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入,如此在微電極開(kāi)口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會(huì)形成緊密的封接,它的電阻能夠達(dá)到數(shù)個(gè)或數(shù)十個(gè)千兆歐,這世界上就是在化學(xué)上完全隔離了吸附在微電極開(kāi)口處的那一片膜同膜的其余部分,通過(guò)微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。紹興藥理學(xué)實(shí)用膜片鉗方案膜片鉗使用操作注意:電腦里面的軟件不得隨意刪改。
膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的水電,檢查實(shí)驗(yàn)室門(mén)窗。2.凡是在本平臺(tái)使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作(值日生按照實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時(shí)長(zhǎng)做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時(shí)關(guān)閉。電熱加熱線(xiàn)溫度很高,在使用時(shí)注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機(jī)電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時(shí)需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤(pán)。5.禁止私拉電線(xiàn),如有實(shí)驗(yàn)要求可與老師及時(shí)溝通。
膜片鉗技術(shù)在通道研究中的重要作用:1.與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道:心肌細(xì)胞通過(guò)各種離子通道對(duì)膜電位和動(dòng)作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。近年來(lái),國(guó)外學(xué)者在人類(lèi)心肌細(xì)胞離子通道特性的研究中取得了許多進(jìn)展,使得心肌藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)由動(dòng)物細(xì)胞模型向人心肌細(xì)胞成為可能。2.對(duì)離子通道生理與病理情況下作用機(jī)制的研究:通過(guò)對(duì)各種生理或病理情況下細(xì)胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過(guò)程中的作用機(jī)制。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):極大的減少了噪聲源,記錄數(shù)據(jù)的電噪音很低。
膜片鉗電生理技術(shù)的基本原理:膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí),因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜只有少數(shù)離子通道。然后對(duì)該膜片實(shí)行電壓鉗位,測(cè)量單個(gè)離子通道開(kāi)放產(chǎn)生的微小電流,這種通道的開(kāi)放是一種隨機(jī)過(guò)程。通過(guò)觀測(cè)單個(gè)通道開(kāi)放的電流幅值分布、開(kāi)放概率、開(kāi)放壽命分布等功能參數(shù),并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。將該部分細(xì)胞采用負(fù)壓吸破,可以形成較常見(jiàn)的全細(xì)胞記錄模式,可以研究整個(gè)細(xì)胞的生理功能和離子通道電生理功能。更進(jìn)一步,還可以把吸管吸附放膜片從細(xì)胞膜上分離出來(lái),以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。這種技術(shù)對(duì)膜內(nèi)外溶液成分及施加藥物操作都很方便。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:膜片鉗技術(shù)在通道中的研究。杭州全自動(dòng)膜片鉗原理
用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開(kāi)閉時(shí)程。南通全自動(dòng)膜片鉗全細(xì)胞記錄哪家好
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):1.向玻璃微電極灌注內(nèi)液時(shí)切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進(jìn)入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時(shí),電極應(yīng)與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。4.換液時(shí)應(yīng)時(shí)刻觀察浴槽,防止液面過(guò)低或液體溢出污染鏡頭,很適液面為微高于出液口。5.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請(qǐng)及時(shí)清洗,防止長(zhǎng)菌影響實(shí)驗(yàn)。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實(shí)驗(yàn)。7.干燥季節(jié)請(qǐng)先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。8.每位實(shí)驗(yàn)者請(qǐng)?jiān)贓盤(pán)建立自己的文件夾儲(chǔ)存數(shù)據(jù)。南通全自動(dòng)膜片鉗全細(xì)胞記錄哪家好
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