Real-time PCR原理：基于探針的化學(xué)法，Real-time PCR應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；依賴熒光能量共振傳遞（FRET）檢測(cè)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，單單檢測(cè)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，DNA及RNA定量；基因表達(dá)驗(yàn)證；等位基因鑒別；SNP分型；病原體和病毒檢測(cè)；多重PCR，探針和目標(biāo)片段的特異性結(jié)合產(chǎn)生熒光信號(hào)，因此減少了背景熒光和假陽(yáng)性；探針可標(biāo)記不同波長(zhǎng)的熒光基團(tuán)，用于多重PCR反應(yīng)。對(duì)于不同的靶序列需要合成不同的探針，原料成本較高。聚合酶鏈反應(yīng)的這種能力增強(qiáng)了許多方法，例如生成雜交探針用于雜交。杭州微量熒光PCR供應(yīng)商

Real-time PCR：Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量較準(zhǔn)確，重現(xiàn)性較好的定量方法，已得到全世界的公認(rèn)，普遍用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的定量方法，在Real-time PCR中，模板定量有兩種策略，相對(duì)定量和定量。珠海骨頭熒光定量PCR原理聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制。

Real-time PCR鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的特點(diǎn)：靈敏度高：PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12）量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克（μg=-6）水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位）；在細(xì)菌學(xué)中很小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。簡(jiǎn)便、快速：PCR反應(yīng)用耐高溫的TaqDNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。純度要求低：不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA粗制品及RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組織等DNA擴(kuò)增檢測(cè)。武漢微量Real-time PCR供應(yīng)商聚合酶鏈反應(yīng)的試劑應(yīng)分配到一次性的等分試樣中。

Real-time PCR從用途上分可以分為定性分析和定量分析：定性分析指的是用于分析待檢測(cè)的樣本中是否存在我們想要檢測(cè)的成分，即待檢測(cè)成分有無的分析。通常，定性分析可以應(yīng)用于病毒以及病原菌的檢測(cè)，物種鑒定以及基因分型等。病毒及病原菌檢測(cè)，如SARS、H1N1病毒，都可以通過Real-time PCR的方法進(jìn)行高靈敏度的檢測(cè)，定性分析樣本是否已被病毒傳播。物種鑒定如我們國(guó)家的一些檢驗(yàn)檢疫機(jī)構(gòu)，想要檢測(cè)進(jìn)口的牛肉制品中是否含有雞源、豬源或鴨源等成分，或者用于檢測(cè)羊奶中是否會(huì)摻有牛奶等等，可以通過Real-time PCR的方法進(jìn)行檢測(cè)。基因分型，如啤酒型，肥胖型基因的檢測(cè)，就是Real-time PCR在基因分型方面的應(yīng)用。在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。

內(nèi)標(biāo)在傳統(tǒng)定量中的作用，由于傳統(tǒng)定量方法都是終點(diǎn)檢測(cè)，即PCR到達(dá)平臺(tái)期后進(jìn)行檢測(cè)，而PCR經(jīng)過對(duì)數(shù)期擴(kuò)增到達(dá)平臺(tái)期時(shí)，檢測(cè)重現(xiàn)性極差。同一個(gè)模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果有很大差異，因此無法直接從終點(diǎn)產(chǎn)物量推算出起始模板量。加入內(nèi)標(biāo)后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準(zhǔn)確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。內(nèi)標(biāo)對(duì)定量PCR的影響，若在待測(cè)樣品中加入已知起始拷貝數(shù)的內(nèi)標(biāo)，則PCR反應(yīng)變?yōu)殡p重PCR，雙重PCR反應(yīng)中存在兩種模板之間的干擾和競(jìng)爭(zhēng)，尤其當(dāng)兩種模板的起始拷貝數(shù)相差比較大時(shí)，這種競(jìng)爭(zhēng)會(huì)表現(xiàn)得更為明顯。但由于待測(cè)樣品的起始拷貝數(shù)是未知的，所以無法加入合適數(shù)量的已知模板作為內(nèi)標(biāo)。也正是這個(gè)原因，傳統(tǒng)定量方法雖然加入內(nèi)標(biāo)，但仍然只是一種半定量的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。無錫組織PCR檢測(cè)技術(shù)服務(wù)

因?yàn)镽eal-time PCR的檢測(cè)靈敏度比較高，所以相應(yīng)的對(duì)引物設(shè)計(jì)的要求就很高。杭州微量熒光PCR供應(yīng)商

Real-time PCR螢光染料摻入法:在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR螢光染料，SYBR螢光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射螢光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何螢光信號(hào)，從而保證螢光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。此方法適用于：1、靈敏度高：使用SYBR可使螢光效果增強(qiáng)到1000倍以上。2、通用性好,不需要設(shè)計(jì)探針,方法簡(jiǎn)便,省時(shí),價(jià)格低廉。3、通用型方法，在國(guó)內(nèi)外科研中普遍使用。4、高通量大規(guī)模的定量PCR檢測(cè)。5、專一性要求不高的定量PCR檢測(cè)。杭州微量熒光PCR供應(yīng)商

上海司鼎生物科技有限公司位于放鶴路1088號(hào)。公司自成立以來，以質(zhì)量為發(fā)展，讓匠心彌散在每個(gè)細(xì)節(jié)，公司旗下免疫印跡（WB)技術(shù)服務(wù)，熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)，在體光纖成像記錄技術(shù)服務(wù)深受客戶的喜愛。公司將不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力，努力學(xué)習(xí)行業(yè)知識(shí)，遵守行業(yè)規(guī)范，植根于醫(yī)藥健康行業(yè)的發(fā)展。司鼎生物立足于全國(guó)市場(chǎng)，依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力，融合前沿的技術(shù)理念，及時(shí)響應(yīng)客戶的需求。