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神經(jīng)生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-02-18

膜片鉗操作實(shí)驗(yàn):膜片鉗實(shí)驗(yàn)難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,經(jīng)過(guò)處理和分析,得出有意義、有價(jià)值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問(wèn)題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動(dòng)劑,如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問(wèn)題,還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決。使用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對(duì)煙堿受體激動(dòng)劑量效曲線的影響,來(lái)確定其作用的動(dòng)力學(xué)特征。神經(jīng)生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

神經(jīng)生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗技術(shù)操作方法:實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:打開總電源及穩(wěn)壓電源,打開電腦、放大器,并開啟程序軟件,新建數(shù)據(jù)文檔并準(zhǔn)備開始試驗(yàn);用P97微電極拉制儀拉制玻璃電極若干備用;檢查減震臺(tái)的減震效果,打開倒置顯微鏡,監(jiān)視器和微操備用,取-血細(xì)胞將其中玻片取出放入小培美血中,置于倒置顯微鏡下,于低倍鏡下尋找狀態(tài)良好的細(xì)胞,并轉(zhuǎn)入高倍鏡下再次確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)及貼壁情況等,確認(rèn)細(xì)胞后,取電極一根充灌電極內(nèi)液,彈出氣泡,然后套入銀絲并插入探頭中扭緊旋鈕,用注射器管道給電極一點(diǎn)點(diǎn)正壓,將電極入水,入水后,查案入水電阻,要在4-8M左右的電極才可以使用,通過(guò)調(diào)節(jié)微操,使電極不斷向下接近細(xì)胞,待電極尖銳端逐漸變清晰并且將要接近細(xì)胞時(shí)停止向下,然后把電極移到細(xì)胞上方調(diào)節(jié)放大器上的調(diào)零旋鈕以保證基線在零水平。廈門全自動(dòng)膜片鉗全細(xì)胞記錄供應(yīng)商膜片鉗使用的注意事項(xiàng):玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。

神經(jīng)生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,電壓鉗是利用負(fù)反饋技術(shù)將膜電位在空間和時(shí)間上固定于某一測(cè)定值,以研究動(dòng)作電位產(chǎn)生過(guò)程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關(guān)系。但電壓鉗只能研究一個(gè)細(xì)胞上眾多通道的綜合活動(dòng)規(guī)律,而無(wú)法反映單個(gè)通道的活動(dòng)特點(diǎn),同時(shí)通過(guò)細(xì)胞內(nèi)微電極引導(dǎo)記錄的離子通道電流其背景噪聲太大。膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái)。

膜片鉗實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法:膜片鉗實(shí)驗(yàn)難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,經(jīng)過(guò)處理和分析,得出有意義、有價(jià)值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問(wèn)題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動(dòng)劑,如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問(wèn)題,還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):操作簡(jiǎn)單,全過(guò)程可自動(dòng)化。

神經(jīng)生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗又稱單通道電流記錄技術(shù),用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100的密封(giga-seal),又稱巨阻封接,被孤立的小膜片面積為μm量級(jí),內(nèi)中只有少數(shù)離子通道。然后對(duì)該膜片實(shí)行電壓鉗位,可測(cè)量單個(gè)離子通道開放產(chǎn)生的pA(10的負(fù)12次方安培)量級(jí)的電流,這種通道開放是一種隨機(jī)過(guò)程。通過(guò)觀測(cè)單個(gè)通道開放和關(guān)閉的電流變化,可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量,并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。還可把吸管吸附的膜片從細(xì)胞膜上分離出來(lái),以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。這種技術(shù)對(duì)小細(xì)胞的電壓鉗位、改變膜內(nèi)外溶液成分以及施加藥物都很方便。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請(qǐng)及時(shí)清洗,防止長(zhǎng)菌影響實(shí)驗(yàn)。神經(jīng)生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

膜片鉗使用的注意事項(xiàng):干燥季節(jié)請(qǐng)先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。神經(jīng)生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點(diǎn)的分析。如神經(jīng)元煙堿受體為配體門控性離子通道,膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)通過(guò)記錄煙堿誘發(fā)電流,可直觀地反映出神經(jīng)元煙堿受體活動(dòng)的全過(guò)程,包括受體與其激動(dòng)劑和拮抗劑的親和力,離子通道開放、關(guān)閉的動(dòng)力學(xué)特征及受體的失敏等活動(dòng)。使用膜片鉗全細(xì)胞記錄技術(shù)觀察拮抗劑對(duì)煙堿受體激動(dòng)劑量效曲線的影響,來(lái)確定其作用的動(dòng)力學(xué)特征。然后根據(jù)分析拮抗劑對(duì)受體失敏的影響,拮抗劑的作用是否有電壓依賴性、使用依賴性等特點(diǎn),可從功能上區(qū)分拮抗劑在煙堿受體上的不同作用位點(diǎn),即判斷拮抗劑是作用在受體的激動(dòng)劑識(shí)別位點(diǎn),離子通道抑或是其它的變構(gòu)位點(diǎn)上。神經(jīng)生物學(xué)電生理膜片鉗技術(shù)

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