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細(xì)胞培養(yǎng)用到的胎牛血清需要滅活嗎:細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清是不可或缺重要培養(yǎng)基,胎牛血清中含有諸多細(xì)胞生長因子,維生素,氨基酸等物質(zhì)。我們常會看到胎牛血清的標(biāo)注上有對產(chǎn)品滅活也有沒有滅活的,胎牛血清為什么不需要熱滅活便可以使用。事實(shí)上,熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。胎牛血清中含有的C1,C6單單達(dá)成年動物血清的1-3%,而其它補(bǔ)體成分單單有成年動物的5-50%,至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物。常州優(yōu)級血清哪家好
胎牛血清:胎牛血清是通過母牛剖腹產(chǎn)胎牛心臟密閉穿刺采的血獲得的新鮮胎牛全血,經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細(xì)胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體,后經(jīng)生產(chǎn)使用多級高置流膜過濾技術(shù)和三級0.1μm終端微濾方法處理后,常用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基,因為胎牛未進(jìn)食過母乳,所以IgG含量低,且含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,故目前多數(shù)實(shí)驗人員選擇的都是胎牛血清進(jìn)行動物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。黃山標(biāo)準(zhǔn)血清血清的保存應(yīng)該注意:熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清。
胎牛血清應(yīng)該如何保存,可以存放多久?胎牛血清可長期儲存于-20℃冰箱中。倘若把胎牛血清存放在4℃冰箱,請不要超過一個月。如果一次性無法用完一瓶血清,建議將胎牛血清無菌條件下分裝并儲存于-20℃,避免反復(fù)凍融。如何正確地解凍胎牛血清?采用逐步解凍法,將胎牛血清從-20℃冰箱轉(zhuǎn)入4℃冰箱融解,隨后分裝。切忌直接將胎牛血清從-20℃冰箱轉(zhuǎn)移至室溫解凍,這樣很容易因為溫度變化太大導(dǎo)致胎牛血清中的蛋白質(zhì)凝集從而出現(xiàn)沉淀。
胎牛血清要求:1、性狀、外觀:淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量:3.5%~5.0%(w/v)。3、血紅蛋白含量:≤0.02%(w/v)。4、無菌檢驗:陰性。5、支原體檢驗:陰性。6、細(xì)菌內(nèi)的毒性:≤5(EU/ml)。7、牛腹瀉病毒:陰性。8、大腸桿菌噬菌體:陰性。9、支持細(xì)胞增殖:(Sp2/0-Ag14)生長曲線(接種濃度)較大增殖濃度≥2.5×106個/ml,細(xì)胞倍增時間:≤15h,克隆率:≥85%。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機(jī)物等。血清的主要作用是提供促接觸和生長因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。
為什么要熱滅活胎牛血清?胎牛血清加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。開啟的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,開啟淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時,推薦使用熱滅活胎牛血清。為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)少量沉淀?胎牛血清沒有預(yù)老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復(fù)凍融。血清提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。黃山標(biāo)準(zhǔn)血清
熱滅活反而影響胎牛血清中的活性成分。常州優(yōu)級血清哪家好
胎牛血清:胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng),是細(xì)胞生長天然的培養(yǎng)基,它為細(xì)胞提供生長因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子等來促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個領(lǐng)域:蛋白質(zhì)組學(xué)、同位素標(biāo)記、細(xì)胞通訊以及報告基因細(xì)胞系的篩選,其中有些領(lǐng)域是相互交叉的。以下稍作舉例。將13C或15N標(biāo)記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞,來標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì),一般培養(yǎng)5-6代,細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標(biāo)記。然后質(zhì)譜分析,即可比較經(jīng)過不同處理的細(xì)胞,其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。常州優(yōu)級血清哪家好
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