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鎮(zhèn)江去外泌體胎牛血清

來源: 發(fā)布時間:2023-03-05

胎牛血清制備:用止血鉗夾住血管,切開1厘米左右的切口進(jìn)行插管,插好管后打開血管的止血鉗,讓牛血順采的血管流入另一個潔凈房間內(nèi)的瓶中。采的血瓶采的血前經(jīng)干烤滅菌(180℃2小時)后,按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口,于采的血前半小時放入37℃恒溫箱備用。采的血前先晃動瓶內(nèi)生理鹽水,使其充分濕潤瓶壁后倒出,再進(jìn)行采的血并加塞封口。將采的血后的瓶放37℃恒溫室2小時,再放入4℃冷庫4小時以備離心。熱滅活:一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化。鎮(zhèn)江去外泌體胎牛血清

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胎牛血清要求:1、性狀、外觀:淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量:3.5%~5.0%(w/v)。3、血紅蛋白含量:≤0.02%(w/v)。4、無菌檢驗:陰性。5、支原體檢驗:陰性。6、細(xì)菌內(nèi)的毒性:≤5(EU/ml)。7、牛腹瀉病毒:陰性。8、大腸桿菌噬菌體:陰性。9、支持細(xì)胞增殖:(Sp2/0-Ag14)生長曲線(接種濃度)較大增殖濃度≥2.5×106個/ml,細(xì)胞倍增時間:≤15h,克隆率:≥85%。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等。合肥進(jìn)口血清血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。

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胎牛血清應(yīng)該如何保存,可以存放多久?胎牛血清可長期儲存于-20℃冰箱中。倘若把胎牛血清存放在4℃冰箱,請不要超過一個月。如果一次性無法用完一瓶血清,建議將胎牛血清無菌條件下分裝并儲存于-20℃,避免反復(fù)凍融。如何正確地解凍胎牛血清?采用逐步解凍法,將胎牛血清從-20℃冰箱轉(zhuǎn)入4℃冰箱融解,隨后分裝。切忌直接將胎牛血清從-20℃冰箱轉(zhuǎn)移至室溫解凍,這樣很容易因為溫度變化太大導(dǎo)致胎牛血清中的蛋白質(zhì)凝集從而出現(xiàn)沉淀。

胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實驗證明,經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清,對于大多數(shù)的細(xì)胞而言都是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或完全沒有任何作用,甚至可能因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,從而造成細(xì)胞生長速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會明顯的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此類沉淀物增加得更多,這常常會使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴增。因此我們建議客戶,若非必須,可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節(jié)省客戶寶貴的時間,更確保血清的質(zhì)量。胎牛血清FBS一般需要冷凍保存。

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胎牛血清:胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng),是細(xì)胞生長天然的培養(yǎng)基,它為細(xì)胞提供生長因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子等來促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個領(lǐng)域:蛋白質(zhì)組學(xué)、同位素標(biāo)記、細(xì)胞通訊以及報告基因細(xì)胞系的篩選,其中有些領(lǐng)域是相互交叉的。以下稍作舉例。將13C或15N標(biāo)記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞,來標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì),一般培養(yǎng)5-6代,細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標(biāo)記。然后質(zhì)譜分析,即可比較經(jīng)過不同處理的細(xì)胞,其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。胎牛血清的蛋白質(zhì)含量:3.5%~5.0%( w/v);血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)。上海標(biāo)準(zhǔn)級血清

胎牛血清的細(xì)菌內(nèi)有毒的 ≤5(EU/ml);牛腹瀉病毒:陰性;大腸桿菌噬菌體:陰性。鎮(zhèn)江去外泌體胎牛血清

如何區(qū)別真假胎牛血清:外觀,拿到血清,較先接觸的是血清外觀,對于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說,外觀的判斷尤為重要,顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采的血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的點很分散,大多是由屠戶采的血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當(dāng)然,國產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細(xì)胞容易破裂??偟膩碚f,國產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進(jìn)口的血清,質(zhì)量較好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,差點的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當(dāng)然,熱滅活胎牛血清或保存不當(dāng)?shù)难澹捎谘t蛋白的破壞氧化,會呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。鎮(zhèn)江去外泌體胎牛血清

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