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胎牛血清制備:用止血鉗夾住血管,切開1厘米左右的切口進(jìn)行插管,插好管后打開血管的止血鉗,讓牛血順采的血管流入另一個(gè)潔凈房間內(nèi)的瓶中。采的血瓶采的血前經(jīng)干烤滅菌(180℃2小時(shí))后,按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口,于采的血前半小時(shí)放入37℃恒溫箱備用。采的血前先晃動(dòng)瓶內(nèi)生理鹽水,使其充分濕潤瓶壁后倒出,再進(jìn)行采的血并加塞封口。將采的血后的瓶放37℃恒溫室2小時(shí),再放入4℃冷庫4小時(shí)以備離心。一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌,如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾。黃山細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清
胎牛血清制備:離心,將準(zhǔn)備好的瓶放入離心套筒調(diào)好平衡后,對(duì)稱放入離心機(jī),按1800轉(zhuǎn)/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。抽血清,取出4℃冷庫離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經(jīng)過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接好空氣濾器,再接到壓縮機(jī)抽氣口上。打開壓縮機(jī),用抽血清孔的管子輕輕抽取采的血瓶內(nèi)的上清液,注意控制好抽管,避免抽到下層血塊。將抽好的血清分裝,即為粗制胎牛血清,放入-20℃冷庫冷藏備用。衢州進(jìn)口胎牛血清銷售公司熱滅活反而影響胎牛血清中的活性成分。
胎牛血清的生產(chǎn)工藝:胎牛血清適合脈沖示蹤實(shí)驗(yàn)(同位素標(biāo)記研究細(xì)胞代謝)適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選,避免外源小分子對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生干擾。透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎(chǔ)上進(jìn)行加工的。胎牛血清在無菌條件下要經(jīng)過0.1微米膜三重過濾,要進(jìn)行一系列的檢測(cè),包括理化性質(zhì)檢查(如滲透壓和pH值),成分檢查(如內(nèi)的毒性和血紅蛋白)、外源因子檢查(如細(xì)菌、病毒和支原體)以及促進(jìn)細(xì)胞增殖的檢查等。透析胎牛血清為保證其性能和安全性,也需具備胎牛血清的這些工藝和檢查。
胎牛血清如何采取?在牛屠宰過程中,如發(fā)現(xiàn)母牛懷孕,就應(yīng)立即將生殖系統(tǒng)從尸體中分離出來,在無菌條件下從子宮中取出小牛,進(jìn)行臍帶打結(jié)處理,清理羊水并消毒。在胎兒兩肋之間直接插入一根針頭到心臟,在真空的條件下,血液通過導(dǎo)管被抽入無菌的血液收集袋內(nèi)。在沒有真空泵時(shí),也可將血液收集袋放在胎牛身體下面,通過重力作用或按摩方式進(jìn)行收集。血液收集后,放在低溫條件下凝集,經(jīng)過離心去掉凝集物而獲得血清。胎牛血清的獲得量取決于胎兒的大小和年齡。胎兒至少3個(gè)月,否則會(huì)因心臟太小而不便于操作。一個(gè)3月齡的胎兒可產(chǎn)生150mL的血清;6月齡和9月齡的胎兒可分別產(chǎn)生350mL和550mL血清。含抗體的血清可作為預(yù)防或醫(yī)治疾病之用。
胎牛血清的生產(chǎn)工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經(jīng)過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對(duì)血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過,在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化學(xué)小分子、核苷酸、某些鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細(xì)胞因子、葡萄糖、殘留Antibiotic和其他外源分子。那么透析的效果如何?以及透析到何時(shí)呢?由于不可能監(jiān)測(cè)全部小分子,因此常選用葡萄糖為體現(xiàn)。血清中葡萄糖<5mg/dL,即可以停止透析了。透析過程中,除監(jiān)測(cè)葡萄糖濃度外(可采用葡萄糖氧化酶方法測(cè)定),還需仔細(xì)監(jiān)測(cè)pH值和滲透壓。胎牛血清應(yīng)用在哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中。泰州細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清哪里有賣
胎牛血清提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長的Hormone,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物。黃山細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清
胎牛血清:在細(xì)胞培養(yǎng)過程,質(zhì)量粗糙的FBS可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)生長速度緩慢、不貼壁、容易老化等現(xiàn)象,從而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)受阻。經(jīng)過質(zhì)量驗(yàn)證的FBS,則可以十分確定這款FBS對(duì)哪些細(xì)胞具有良好的培養(yǎng)效果,進(jìn)而判斷其能否把自己的細(xì)胞養(yǎng)好。對(duì)于質(zhì)量好的FBS,通常采用血清敏感性細(xì)胞(如干細(xì)胞)來進(jìn)行培養(yǎng)驗(yàn)證,若培養(yǎng)效果良好,則其他常規(guī)細(xì)胞系的培養(yǎng)就更不在話下。FBS作為其他行業(yè)的副產(chǎn)品,其生產(chǎn)在本質(zhì)上會(huì)受到天氣、食物供應(yīng)、經(jīng)濟(jì)條件和牛群規(guī)模等各種因素的影響,導(dǎo)致血清的供應(yīng)可能出現(xiàn)貨源、價(jià)格及批次間的不穩(wěn)定性,從而造成實(shí)驗(yàn)的不順甚至實(shí)驗(yàn)失敗。在過去,國內(nèi)外已有多個(gè)實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)過因血清批間差異大而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果無法重復(fù)的情況,浪費(fèi)了巨大的時(shí)間和金錢成本。黃山細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清
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