冷凍電鏡技術揭示生物分子細節(jié)：科學家在透射電子顯微鏡之上發(fā)明了冷凍電鏡，實現(xiàn)了生物分子“近原子級”的分辨率，讓人類終于可以一窺究竟生物分子是如何執(zhí)行其功能。在過去幾年里，冷凍電子顯微鏡技術逐漸成為結構生物學的重要研究工具。冷凍電鏡技術的基本原理是將生物大分子溶液置于電鏡載網(wǎng)上形成一層非常薄的水膜，然后利用快速冷凍技術將其瞬間冷凍至液氮溫度下。冷凍速度非常快，以至于水膜無法形成晶體，而是形成一層玻璃態(tài)的冰。生物大分子就被固定在這層薄冰里。將這樣的冷凍樣品保持低溫放置在透射電子顯微鏡下觀察，從而獲得生物大分子的結構，被稱為冷凍電鏡技術。冷凍電鏡技術能夠從分子層面進行詳細的研究，解析基于結構的藥物研發(fā)的分子基礎。連云港冷凍透射電子顯微鏡技術原理

冷凍電鏡技術中的單顆粒分析法（Singleparticleanalysis,SPA）：單顆粒技術獲得投影的具體方法：制備很多具有同樣結構的大分子樣品，將其進行分散冷凍后進行隨機的投影拍照，再通過計算模擬測定角度，對具有相同角度的粒子進行組合，突出其中更特殊、更容易解釋的特征。單顆粒冷凍電鏡是針對單個粒子進行重構的技術，但我們的研究對象往往是多構象或結構異質(zhì)的蛋白，顆粒之間存在細微差別，這是一些蛋白質(zhì)無法獲得高分辨結構的重要原因之一。對于結構異質(zhì)性樣品的分析，我們需要首先將樣品分成幾個同質(zhì)的子集，然后分別進行三維重建。由于單顆粒分析法理論成像分辨率更高，尤其在分析具有同質(zhì)性結構的樣品時表現(xiàn)出更方便、更優(yōu)異的成像能力，因此得到了更普遍的應用。單顆粒分析法的研究對象可以是具有某種對稱性的顆粒，也可是不具有任何對稱性的蛋白分子或復合體，尤其是針對核糖體的表征。連云港冷凍透射電子顯微鏡技術原理冷凍電鏡技術中的單顆粒分析法的研究對象可以是具有某種對稱性的顆粒，也可不具有任何對稱性的蛋白分子。

冷凍電子顯微鏡技術中電子斷層掃描重構技術：電子斷層掃描技術是從一個物體的投影圖像重構獲得物體內(nèi)部結構的技術，通過獲取同一物體的多個連續(xù)角度下的二維投影圖來反向重構它的三維結構。簡單地說，電子斷層掃描技術就是將一個物體(樣品)沿著一個與電子束垂直的軸旋轉，每旋轉一個角度，采集這個物體在相對應方向上的二維投影像，通過對這些二維投影圖的處理(相互配準)，將不同角度的二維投影圖反向重構(如加權背投影等方法)，獲得樣品整體三維結構的技術。電子斷層成像適合于在納米級尺度上研究不具有結構均一性的蛋白、病毒、細胞器以及它們之間組成的復合體的三維結構。與電子晶體學和單顆粒技術相比，這種技術無需樣品顆粒具有結構同一性，也不強調(diào)樣品具有一定的對稱性。因此，雖然目前電子斷層成像所獲得的結構的分辨率(約4~10納米)不能與以上兩種技術相比，但其在研究非定形、不對稱和不具全同性的生物樣品的三維結構和功能中有著不可替代的作用。

冷凍電鏡技術原理之電子晶體學：利用電子顯微鏡對生物大分子在一維、二維以致三維空間形成的高度有序重復排列的結構(晶體)成像或者收集衍射圖樣，進而解析這些生物大分子的結構，這種方法稱為電子晶體學。其適合的樣品分子量范圍為10~500kD，Zgao分辨率約0.19nm。該方法與X射線晶體學的類似之處在于均需獲得高度均一的生物大分子的周期性排列，不同之處是利用電子顯微鏡除了可以獲得晶體的電子衍射外還可以通過獲得晶體的圖像來進行結構解析。冷凍電鏡技術的獨特優(yōu)勢：適合于研究結構不規(guī)則的大分子復合物，對于分子量的上限沒有限制。

單顆粒冷凍電鏡技術樣品的篩選和數(shù)據(jù)采集：在開始高分辨數(shù)據(jù)采集前，可以利用冷凍電鏡先對樣品質(zhì)量進行評估，包括但不限于蛋白濃度、穩(wěn)定性和分布，冰層厚度、質(zhì)量和載網(wǎng)各處的均一性等的檢查。用戶可以在120kV電鏡或200kV電鏡上進行此篩樣過程。待到樣品通過篩選，用戶可以利用300kV或200kV電鏡采集更大的數(shù)據(jù)量來幫助開展2D和3D分析。200kV-TalosArctica透射電鏡配備了直接電子探測相機FalconIII,在樣品質(zhì)量較高時，較高可以獲得<3?的數(shù)據(jù)。目前的300kV-TitianKrios透射電鏡有兩套，其中一臺配備了目前行業(yè)前列的K3直接電子探測相機，另一臺配備有K2相機和能量過濾器，兩套電鏡均能夠進行全自動、長時間無人照看的數(shù)據(jù)收集操作，可實現(xiàn)樣品的大規(guī)模數(shù)據(jù)采集，并獲得極高分辨率的結構信息。收集得到數(shù)以萬計的單顆粒物照片后，用戶可以使用平臺集群已安裝的常用三維重構計算軟件以及相關生物軟件對數(shù)據(jù)集進行計算處理。冷凍電鏡技術能夠揭示生物分子細節(jié)。珠海低溫電子顯微鏡技術方案

冷凍電鏡技術的獨特優(yōu)勢：冷凍電鏡單粒子法既可以對具有對稱結構的大分子進行研究。連云港冷凍透射電子顯微鏡技術原理

為什么要做冷凍透射電子顯微鏡技術服務？a.反應樣品溶液里結構：如有機分子組裝成的微球、囊泡、膠束、納米管、片層、水凝膠結構等（往往一般透射拍攝到的都是溶液揮發(fā)干了之后的結構，但是這樣的結構無論是形貌和尺寸和溶液里都有一定差別，現(xiàn)在好多文章的審稿意見都會需要這類結構的透射照片在溶液里的真實形貌，說簡單了就是讓補一個冷凍透射）；b.不穩(wěn)定的納米結構：比如經(jīng)不起強電子束照射的樣品（MOF、COF等若相互作用力結合的材料，如金屬配位、氫鍵相互作用、親疏水作用力、ππ堆疊等）在強電子束照射下結構會坍塌，冷凍電鏡全程在-160℃下可以做到對樣品損害較?。籧.生物類分子好多都需要冷凍，因為生物分子本身都需要在水或者血液等存活，一些生物樣品構筑的一些納米結構，如納米微球、囊泡、膜、多孔材料等等。連云港冷凍透射電子顯微鏡技術原理

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