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溫州全自動膜片鉗技術(shù)研究方案

來源: 發(fā)布時間:2023-06-11

膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。膜片鉗使用的注意事項:玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。溫州全自動膜片鉗技術(shù)研究方案

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膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性(1)光能應用于懸浮細胞的紀錄,因此大部分的紀錄對象為化細胞,而對于需要貼壁生長的大多數(shù)正常細胞,現(xiàn)有的自動膜片鉗系統(tǒng)就無法紀錄;(2)在紀錄對象上,目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀錄胞膜形狀平整飽滿的細胞,大部分是工具細胞如化細胞,此類細胞有比較強的細胞膜可以禁得起各種人為操作,而許多具有研究價值的細胞(例如元代培養(yǎng)的神經(jīng)元)胞膜較弱容易破裂,且胞體表面不規(guī)整,現(xiàn)有的自動膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場。溫州藥理學離子通道方案膜片鉗技術(shù)可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細菌離子通道。

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膜片鉗技術(shù)的應用范圍:①膜片鉗技術(shù)在通道中的研究;②與藥物作用有關的心肌離子通道研究;③對離子通道生理與病理作用機制的研究;④對單細胞形態(tài)與功能關系的研究;⑤對藥物作用機制的研究;⑥在心血管藥理方面的研究;⑦創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選的研究;⑧在神經(jīng)科學中的研究?,F(xiàn)如今,膜片鉗技術(shù)已經(jīng)大為普及,并普遍活躍在離子通道相關的研究當中。也許未來有1天,膜片鉗技術(shù)會過時,但兩百年來的探索歷程,數(shù)代學者們的心血,以及它在科學研究中的功績會一直被銘記。

膜片鉗操作實驗:膜片鉗放大器是整個實驗系統(tǒng)中的中心,它可用來作單通道或全細胞記錄,其工作模式可以是電壓鉗,也可以是電流鉗。從原理來說,膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結(jié)構(gòu)形式,即電阻反饋式和電容反饋式,前者是一種典型的結(jié)構(gòu),后者因用反饋電容取代了反饋電阻,降低了噪聲,所以特別適合很低噪聲的單通道記錄。由于供膜片鉗實驗的專門計算機硬件及相應的軟件程序的相繼出現(xiàn),使得膜片鉗實驗操作簡便、效率提高。如與EPC-9型膜片鉗放大器(內(nèi)含ITC-16數(shù)據(jù)采集/接口卡)配套使用的軟件PULSE/PULSEFIT,它既可產(chǎn)生刺激波形,控制數(shù)據(jù)采集,又可分析數(shù)據(jù),同時具有用于膜電容監(jiān)測的鎖相放大器,多種軟件功能集成于一體。膜片鉗使用操作注意:在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。

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膜片鉗實驗系統(tǒng):根據(jù)不同的電生理實驗要求,可以組建不同的實驗系統(tǒng),但有若干共同的基本部件,包括機械部分(防震工作臺、屏蔽罩、儀器設備架)、光學部分(顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng))、電子部件(膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集的設備、計算機系統(tǒng))和微操縱器在大多數(shù)膜片鉗實驗,要求所有實驗儀器及設備均具有良好的機械穩(wěn)定性,以使微電極與細胞膜之間的相對運動盡可能小。防震工作臺放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器,其他設備置于臺外。屏蔽罩由銅絲網(wǎng)制成,接地以防止周圍環(huán)境的雜散電場對膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設備架要靠近工作臺,便于測量儀器與光學儀器配接。膜片鉗的應用:在心血管藥理研究中的應用。東莞細胞生物學膜片鉗電生理技術(shù)原理

膜片鉗使用操作注意:實驗結(jié)束后必須關閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。溫州全自動膜片鉗技術(shù)研究方案

膜片鉗技術(shù)及其應用:它是作者在\"膜片鉗技術(shù)及其應用\"領域所進行的研究工作的總結(jié),同時也吸取了國際上的先進技術(shù)和新近的研究成果。內(nèi)容包括:細胞電生理與膜片鉗技術(shù),膜片鉗系統(tǒng)的組建及實驗技術(shù)概要,膜片鉗放大器原理與低噪聲設計,單通道和全細胞電流記錄技術(shù),數(shù)據(jù)采集和分析,細胞分泌活動的膜電容監(jiān)測技術(shù)和安培測量技術(shù),細胞內(nèi)鈣離子濃度的測量及鈣庫特性,腦切片膜片鉗技術(shù),心肌細胞的藥理特性和植物細胞的離子通道特性。溫州全自動膜片鉗技術(shù)研究方案

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