膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù):膜片鉗技術(shù)的建立,對(duì)生物學(xué)科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過(guò)離子通道的離子電流來(lái)反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè)的離子通道分子活動(dòng)的技術(shù)。些技術(shù)的出現(xiàn)自然將細(xì)胞水平和分子水平的生理學(xué)研究聯(lián)系在一起,同時(shí)又將神經(jīng)科學(xué)的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個(gè)分野互不聯(lián)系、互不滲透,阻礙人們很全認(rèn)識(shí)能力的弊端。由于電極與細(xì)胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,因此,此片膜內(nèi)開(kāi)放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管,用一個(gè)極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測(cè)量此電流強(qiáng)度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術(shù)的基本原理是通過(guò)負(fù)反饋使得膜電位與指令電壓相等,在電壓鉗制的條件下記錄膜電流。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):換液時(shí)應(yīng)時(shí)刻觀察浴槽,防止液面過(guò)低或液體溢出污染鏡頭。徐州細(xì)胞生物學(xué)腦定位膜片鉗研究方案
膜片鉗技術(shù)操作方法:實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:打開(kāi)總電源及穩(wěn)壓電源,打開(kāi)電腦、放大器,并開(kāi)啟程序軟件,新建數(shù)據(jù)文檔并準(zhǔn)備開(kāi)始試驗(yàn);用P97微電極拉制儀拉制玻璃電極若干備用;檢查減震臺(tái)的減震效果,打開(kāi)倒置顯微鏡,監(jiān)視器和微操備用,取-血細(xì)胞將其中玻片取出放入小培美血中,置于倒置顯微鏡下,于低倍鏡下尋找狀態(tài)良好的細(xì)胞,并轉(zhuǎn)入高倍鏡下再次確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)及貼壁情況等,確認(rèn)細(xì)胞后,取電極一根充灌電極內(nèi)液,彈出氣泡,然后套入銀絲并插入探頭中扭緊旋鈕,用注射器管道給電極一點(diǎn)點(diǎn)正壓,將電極入水,入水后,查案入水電阻,要在4-8M左右的電極才可以使用,通過(guò)調(diào)節(jié)微操,使電極不斷向下接近細(xì)胞,待電極尖銳端逐漸變清晰并且將要接近細(xì)胞時(shí)停止向下,然后把電極移到細(xì)胞上方調(diào)節(jié)放大器上的調(diào)零旋鈕以保證基線在零水平。莆田神經(jīng)生物學(xué)腦定位膜片鉗設(shè)計(jì)公司膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:在神經(jīng)科學(xué)中的研究。
膜片鉗技術(shù)與其他生物檢測(cè)技術(shù)的結(jié)合應(yīng)用:1.膜片鉗與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合應(yīng)用:利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術(shù)可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)成像研究,將膜片鉗技術(shù)與光學(xué)顯微成像技術(shù)結(jié)合使用不但可以檢測(cè)細(xì)胞的電流變化情況,而且還可以對(duì)細(xì)胞的電信號(hào)傳遞活動(dòng)進(jìn)行成像觀察。2.膜片鉗與原子力顯微鏡結(jié)合應(yīng)用:將膜片鉗和AFM結(jié)合使用的技術(shù)可以提高細(xì)胞電生理檢測(cè)的分辨率和靈敏度;而且,在獲得細(xì)胞電生理信息的同時(shí),還能獲取細(xì)胞的生物力學(xué)性質(zhì),從而更很全地研究細(xì)胞的生理功能。
膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的水電,檢查實(shí)驗(yàn)室門窗。2.凡是使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作(值日生按照實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時(shí)長(zhǎng)做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時(shí)關(guān)閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時(shí)注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機(jī)電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時(shí)需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實(shí)驗(yàn)要求可與老師及時(shí)溝通。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí),因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):藥液交換非常迅速,作用時(shí)間快。
膜片鉗使用的注意事項(xiàng):1.向玻璃微電極灌注內(nèi)液時(shí)切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進(jìn)入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時(shí),電極應(yīng)與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。4.換液時(shí)應(yīng)時(shí)刻觀察浴槽,防止液面過(guò)低或液體溢出污染鏡頭,很適液面為微高于出液口。5.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請(qǐng)及時(shí)清洗,防止長(zhǎng)菌影響實(shí)驗(yàn)。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實(shí)驗(yàn)。7.干燥季節(jié)請(qǐng)先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。8.每位實(shí)驗(yàn)者請(qǐng)?jiān)贓盤建立自己的文件夾儲(chǔ)存數(shù)據(jù)。膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點(diǎn)的分析。徐州細(xì)胞生物學(xué)腦定位膜片鉗研究方案
膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:對(duì)單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究。徐州細(xì)胞生物學(xué)腦定位膜片鉗研究方案
膜片鉗芯片技術(shù)是繼細(xì)胞芯片之后的又一種嶄新的分析細(xì)胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù).由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準(zhǔn)確性特點(diǎn)外,還具有高通量、自動(dòng)化以及細(xì)胞多通道參數(shù)和細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)在線和實(shí)時(shí)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn).因此,該芯片技術(shù)將很大促進(jìn)細(xì)胞離子通道、細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)傳導(dǎo)以及藥物篩選的研究和應(yīng)用.文中具體介紹了膜片鉗芯片技術(shù)的發(fā)展及其應(yīng)用,結(jié)合作者的研究工作,著重介紹了膜片鉗芯片技術(shù)在味覺(jué)細(xì)胞研究的比較新進(jìn)展,并結(jié)合神經(jīng)芯片研究細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的方法,對(duì)采用膜片鉗芯片技術(shù)在細(xì)胞和分子水平上研究味覺(jué)的敏感機(jī)理和傳導(dǎo)機(jī)制的應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。徐州細(xì)胞生物學(xué)腦定位膜片鉗研究方案
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