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金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-07-11

膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的水電,檢查實(shí)驗(yàn)室門(mén)窗。2.凡是在本平臺(tái)使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作(值日生按照實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時(shí)長(zhǎng)做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時(shí)關(guān)閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時(shí)注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機(jī)電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時(shí)需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤(pán)。5.禁止私拉電線,如有實(shí)驗(yàn)要求可與老師及時(shí)溝通。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請(qǐng)及時(shí)清洗,防止長(zhǎng)菌影響實(shí)驗(yàn)。金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理

金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理,膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗的應(yīng)用:對(duì)單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究:將膜片鉗技術(shù)與單細(xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)欠磻?yīng)技術(shù)結(jié)合,在全細(xì)胞膜片鉗記錄下,將單細(xì)胞內(nèi)容物或整個(gè)細(xì)胞(包括細(xì)胞膜)吸入電極中,將細(xì)胞內(nèi)存在的各種mRNA全部快速逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,再經(jīng)常規(guī)PCR擴(kuò)增及待檢的特異mRNA的檢測(cè),借此可對(duì)形態(tài)相似而電活動(dòng)不同的結(jié)果做出分子水平的解釋或?yàn)閱渭?xì)胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)提供標(biāo)本,為同一結(jié)構(gòu)中形態(tài)非常相似但功能不同的事實(shí)提供分子水平的解釋。金華細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗全細(xì)胞記錄應(yīng)用全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):軟件的功能全部,可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案自動(dòng)執(zhí)行實(shí)驗(yàn)。

金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理,膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗技術(shù)的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經(jīng)過(guò)加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進(jìn)器的操縱下,與清潔處理過(guò)的細(xì)胞膜形成高阻抗封接,導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來(lái),由于電性能隔離與微電極的相對(duì)低電阻(1~5MΩ),只要對(duì)微電極施以電壓就能對(duì)膜片進(jìn)行鉗制,從微電極引出的微小離子電流通過(guò)高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計(jì)算機(jī)進(jìn)行分析處理。膜片鉗技術(shù)實(shí)現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接,并能通過(guò)特定的記錄儀器反映這些變化。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接。

膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用:它是作者在\"膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用\"領(lǐng)域所進(jìn)行的研究工作的總結(jié),同時(shí)也吸取了國(guó)際上的先進(jìn)技術(shù)和新近的研究成果。內(nèi)容包括:細(xì)胞電生理與膜片鉗技術(shù),膜片鉗系統(tǒng)的組建及實(shí)驗(yàn)技術(shù)概要,膜片鉗放大器原理與低噪聲設(shè)計(jì),單通道和全細(xì)胞電流記錄技術(shù),數(shù)據(jù)采集和分析,細(xì)胞分泌活動(dòng)的膜電容監(jiān)測(cè)技術(shù)和安培測(cè)量技術(shù),細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的測(cè)量及鈣庫(kù)特性,腦切片膜片鉗技術(shù),心肌細(xì)胞的藥理特性和植物細(xì)胞的離子通道特性。膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):凡是在本平臺(tái)使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求。

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膜片鉗電生理技術(shù)的記錄方式:全細(xì)胞記錄法,膜穿孔記錄法(perforatedpatchclamp),巨膜片鉗記錄法(giantmembranepatchclamp),松散封接記錄法(loosepatchclamp)等技術(shù)應(yīng)用:1.為了更換電極內(nèi)液和從電極內(nèi)施加藥物,發(fā)展了微電極內(nèi)灌技術(shù)(micropipetteperfusiontechnique)2.在研究細(xì)胞間的縫隙連接(gapjunction)通路時(shí),發(fā)展了雙膜片鉗記錄法(doublepatchrecording)3.將富含神經(jīng)遞質(zhì)受體的游離膜片鉗靠近突觸部位,可檢測(cè)遞質(zhì)釋放和突觸活動(dòng),這一技術(shù)稱為膜片鉗探針技術(shù)(detector-patchtechnique)4.將特異的膜片探針插入卵母細(xì)胞,可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)第二信使含量,此為膜片填塞技術(shù)(patchcrammingtechnique)5.為研究細(xì)胞的胞吞與胞吐機(jī)制,發(fā)展了膜電容測(cè)定法(membranecapacitancemeasurement)。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):安裝玻璃微電極時(shí),電極應(yīng)與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。溫州藥理學(xué)膜片鉗成像方案

全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):外灌流時(shí)間常數(shù):~200ms;內(nèi)灌流時(shí)間常數(shù):~2s。金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理

膜片鉗技術(shù)——打開(kāi)細(xì)胞電生理之門(mén):定義:膜片鉗技術(shù)被稱為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”,是一種基于電工學(xué)和電化學(xué)原理的分析手段,可以通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的電信號(hào)(電生理性質(zhì))來(lái)研究化學(xué)物質(zhì)、電、機(jī)械力等刺激因素對(duì)細(xì)胞功能的影響,從而幫助揭示細(xì)胞在生命活動(dòng)中的化學(xué)和生物學(xué)機(jī)制。原理:膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個(gè)離子通道、面積為幾個(gè)平方微米的細(xì)胞膜通過(guò)負(fù)壓吸引封接起來(lái),由于電極與細(xì)胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實(shí)上與膜的其他部分從電學(xué)上隔離,因此,此片膜內(nèi)開(kāi)放所產(chǎn)生的電流流進(jìn)玻璃吸管,用一個(gè)極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測(cè)量此電流強(qiáng)度,就替代單一離子通道電流。金華醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)原理

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