用于體外細(xì)胞培養(yǎng)的胎牛血清及其制備方法:包括以下步驟:采集懷孕母牛的胎牛血液獲得血漿,具體步驟如下:采用含有體積含量4-6%葡萄糖的注射液、含有質(zhì)量含量0.2-0.6%檸檬酸鈉的水溶液進(jìn)行混合,將上述兩者混合后的混合液A置入取血容器內(nèi)充分滋潤容器內(nèi)壁;將胎牛血液置入上述滋潤過的取血容器內(nèi),搖動使其與胎牛血液均勻混合;將混合均勻的含有胎牛血液的混合液B置入采的血試管,保持血液在40℃以下恒溫狀態(tài),然后將采的血試管在離心機(jī)中以3000-14000r/min轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)5-30分鐘,分離出血漿、血小板、血球,將所得血漿、血小板、血球分別采用采的血試管分離存放;胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基。深圳細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清多少錢
挑選胎牛血清:Antibiotic含量,Antibiotic的使用情況,也需考慮在內(nèi)。國內(nèi)外的血清,都不對Antibiotic進(jìn)行測試(無四環(huán)素胎牛血清之外)。但相較于國內(nèi)Antibiotic的濫用,在其他國家,Antibiotic使用大多較為嚴(yán)格,用量有限,同時每頭牛的產(chǎn)品包括血清都可以追溯源頭,所以國外胎牛血清不含Antibiotic或者含量極低。內(nèi)的毒性含量,在挑選血清時,還應(yīng)關(guān)注內(nèi)的毒性含量的高低。內(nèi)的毒性含量高,容易引起細(xì)胞衰老、凋亡等情況,好的血清,內(nèi)的毒性應(yīng)該是極低的。因此,內(nèi)的毒性可作為血清等級評判標(biāo)準(zhǔn)之一,其含量的高低,在一定程度上,體現(xiàn)了血清品質(zhì)的優(yōu)劣。鎮(zhèn)江細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清供應(yīng)商熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。
胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。所有胎牛血清均在當(dāng)?shù)孬F醫(yī)部門的監(jiān)督下從注冊的出口屠場采集,符合國際動物協(xié)會要求。胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng),是細(xì)胞生長天然的培養(yǎng)基,它為細(xì)胞提供生長因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子等來促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。
胎牛血清如何采取?在牛屠宰過程中,如發(fā)現(xiàn)母牛懷孕,就應(yīng)立即將生殖系統(tǒng)從尸體中分離出來,在無菌條件下從子宮中取出小牛,進(jìn)行臍帶打結(jié)處理,清理羊水并消毒。在胎兒兩肋之間直接插入一根針頭到心臟,在真空的條件下,血液通過導(dǎo)管被抽入無菌的血液收集袋內(nèi)。在沒有真空泵時,也可將血液收集袋放在胎牛身體下面,通過重力作用或按摩方式進(jìn)行收集。血液收集后,放在低溫條件下凝集,經(jīng)過離心去掉凝集物而獲得血清。胎牛血清的獲得量取決于胎兒的大小和年齡。胎兒至少3個月,否則會因心臟太小而不便于操作。一個3月齡的胎兒可產(chǎn)生150mL的血清;6月齡和9月齡的胎兒可分別產(chǎn)生350mL和550mL血清。因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分較少。
胎牛血清的處理方法主要有以下幾種:1.活性炭處理,活性炭可以與親脂性分子結(jié)合,因此已用于從FBS中去除Hormone,例如雄雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇、睪酮、三碘甲狀腺原氨酸(T3)和甲狀腺素(T4)。這些血清脂質(zhì)Hormone傾向于干擾免疫測定系統(tǒng)和胰島素測定方法。2.透析,透析可以從FBS中去除所有分子量小于10,000MW的分子。這包括極性和非極性分子。去除細(xì)胞因子、葡萄糖、氨基酸和許多其他物質(zhì)。透析還可以去除FBS中的Antibiotic和其他外源性分子。胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng),是細(xì)胞生長天然的培養(yǎng)基。蘇州特級血清價格
胎牛血清能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。深圳細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清多少錢
胎牛血清:胎牛血清參與細(xì)胞培養(yǎng),是細(xì)胞生長天然的培養(yǎng)基,它為細(xì)胞提供生長因子、結(jié)合蛋白、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子等來促進(jìn)體外細(xì)胞培養(yǎng)。透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。這主要包括四個領(lǐng)域:蛋白質(zhì)組學(xué)、同位素標(biāo)記、細(xì)胞通訊以及報告基因細(xì)胞系的篩選,其中有些領(lǐng)域是相互交叉的。以下稍作舉例。將13C或15N標(biāo)記的氨基酸摻入到培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞,來標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì),一般培養(yǎng)5-6代,細(xì)胞中的蛋白質(zhì)將都被同位素標(biāo)記。然后質(zhì)譜分析,即可比較經(jīng)過不同處理的細(xì)胞,其內(nèi)部蛋白質(zhì)豐度的變化。深圳細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清多少錢
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