病毒核酸檢測過程中,病毒保存液的作用尤其重要,我們的檢驗工作不可能在采集到樣本后就立馬進行檢測,從采集完樣品到開始檢測,中間可能遇到各種問題,比如異地運輸或郵寄標本,或樣品太多無法按時進行檢測等等,這時病毒保存液就起到了相當大的作用。病毒保存液分為滅活型和非滅活型,那么我們一般選用哪種比較好呢?
滅活型:病毒和細菌受理化因素作用后失去性,稱為滅活(inactivation)。 多數(shù)病毒比細菌更容易被滅活。這也使得病毒的長期保存通常比細菌的保存更困難。其實大多數(shù)病毒耐冷不耐熱,對熱不穩(wěn)定。55—60℃,通常在數(shù)分鐘內,病毒的衣殼蛋白就會發(fā)生變性,使病毒失去能力。這可能是因為此時的病毒已失去了對正常細胞的吸附能力和/或脫衣能力。病毒存在不易保存和易的弊端,但滅活型病毒保存液完美解決了這一弊端。
可以用來采集咽拭子鼻拭子或者特定部位的組織樣本儲存的樣本可以用于后續(xù)的核酸檢測或者病毒培養(yǎng)臨床實驗。重慶病毒保存管病毒保存液價目表
我們除了以上介紹的滅活型的病毒保存液外,還有非滅活的病毒保存液。含有Hank's液體、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、BSA等。多種聯(lián)合,具有抗細菌和抗的作用;牛血清蛋白(BSA)作為蛋白穩(wěn)定劑,可在病毒的蛋白質外殼形成一種保護膜,使其不易分解,保證病毒的完整性;Hank's緩沖劑構建的中性環(huán)境,有助于增加病毒的生存時間和穩(wěn)定性。滅活型和非滅活型病毒保存液通常用于臨床流感、禽流感、手足口病毒、麻疹等病毒標本及支原體、脲原體、衣原體等標本的采集和運送。深圳一次性使用病毒保存管保存液什么價格病毒保存液包括Hank's液基礎、慶大霉素、、BSA (V)、冷凍保護劑、生物緩沖劑和氨基酸。
的病毒采樣管比較大的特點就是它所采集釋放的病毒數(shù)量比普通的病毒采樣管要高出很多,而且保證了病毒粒子的活性和完整性,為后續(xù)的病毒分離和核酸檢測提供了首要保障。
(1)樣品有效性方面:非滅活病毒保存液必須維持病原體因子的活性,比較好是可以在常溫下可以保持病毒的活性。滿足從樣品采樣到實驗室檢測的時間。
有必要限制和預防共生微生物的繁殖,確保診斷試驗的可靠性
滅活病毒保存液需要將病毒滅活但維持病毒的核酸。
(2)安全性方面:因為病毒采樣管搭載的基本上都是性物質,一部分是高病原性性物質,因此對包裝容器的要求非常嚴格,需要滿足安全的同時保證在運輸時液體不泄漏。
非滅活型的病毒采樣管:
除了滅活型的病毒保存液,保存的病毒完整性更好,檢出率更高,出了核酸檢測外還可以用于其他研究。
滅活型病毒保存液則使用上更安全,操作環(huán)境要求也不用那么嚴格,各有各的優(yōu)勢,目前研究的非滅活病毒保存液的成分主要為Hank’s液基礎,在這個基礎上,添加了氯化鉀,氯化鎂和氯化鈣等物質為致病菌提供必須的營養(yǎng)離子使之專一性更強、且保存時間更長,更大限度保存致病菌形態(tài)的完整性,提高致病菌提取率。
非滅活型的一次性病毒采樣管的特點:
①、低溫非凍型保存,不破壞病毒的外殼,方便長途運輸。
②、適用于各種拭子樣品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子等。
③、保存液中添加了氯化鉀、氯化鎂和氯化鈣等物質為致病菌提供了必須的營養(yǎng)離子,使病菌專一性更強、且保存時間更長,可以更大限度保存致病菌形態(tài)的完整性,提高致病菌的提取率。
④、保存液中的成分可以有效防止細菌和污染。 主要是以運送培養(yǎng)基為基礎改良的病毒維持型保存液。它能夠保持病毒在外的活性以及抗原和核酸的完整性。
病毒保存液具體的保存時間應該要區(qū)分不同類型的保存液。通常在采樣前,病毒保存液不管是滅活型的還是非滅活型的,都可以在常溫下保存半年甚至是一年,但是在采樣后保存時間是很短的。這是因為保存的時間更多情況并不是取決于保存液的質量,而是跟病毒或者是核酸本身的特性相關。
生物病毒是一種個體及其微小的生物,甚至比、細菌還要小得多,必須在活細胞內寄生并以復制方式增殖,是一種非細胞型生物。因此,不論是滅活型還是非滅活型,采樣之后,病毒都是只能存活很短時間的。如果沒有病毒保存液,病毒在體外幾分鐘就會大量降解。采樣管主要是用于病毒核酸檢測的,所以滅活型的保存液雖然使病毒裂解了,但是里面添加的RNA酶抑制劑可以保護其核酸,實驗時只要能檢測出核酸就可以作出診斷了。 病毒核酸檢測過程中,病毒保存液的作用尤其重要,我們的檢驗工作不可能在采集到樣本后就立馬進行檢測。背景病毒保存管病毒保存液價格便宜
病毒保存液主要適用于****、手足口病毒、流感病毒等常見的病毒樣本采集保存運輸工作。重慶病毒保存管病毒保存液價目表
另一種以核酸提取裂解液為基礎配制的保存液,主要成分為平衡鹽類、EDTA螯合劑、胍鹽(如異硫氰酸胍、鹽酸胍等)、陰離子表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉)、陽離子表面活性劑(如十四烷基三甲基草酸銨)、苯酚、8-羥基喹啉、二硫蘇糖醇(DTT)、蛋白酶K等幾種或多種組分,這種保存液是直接裂解病毒釋放核酸,消除核酸分解酶(RNase),如果用于RT-PCR較為合適,但裂解液可以滅活病毒,這種樣本不能用于病毒的培養(yǎng)分離。
病毒保存液使用的金屬離子螯合劑推薦使用EDTA鹽類(如乙二胺四乙酸二鉀、乙二胺四乙酸二鈉等),不推薦使用肝素類(如肝素鈉、肝素鋰),以免影響PCR檢測。 重慶病毒保存管病毒保存液價目表
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