首先,Amicon? Ultra超濾管的蛋白比較低起始濃度為25ug/ml。請確保樣本的起始濃度大于這個濃度。其次,如果問題仍然出現(xiàn),請不要丟棄樣本濾過液以便用于分析可能的原因: 1)如果目的樣本在濾過液中,那么請排查: a)是否選擇了合適截留分子量的超濾管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)? b)使用的離心力是否是在限定范圍內(nèi)?如果使用的是rpm,請換算成相應(yīng)的g離心力,具體換算方法請垂詢。 c)離心機(jī)**近是否有校準(zhǔn)過? d)是否***嘗試這個蛋白?一個好的超濾濃縮管代理銷售需要具備哪些特點(diǎn)您了解嗎?江蘇Millipore超濾濃縮管批發(fā)
大體積樣品濃縮 Centricon? Plus-70離心濃縮裝置 用于15-70mL生物溶液的快速濃縮等操作。70mL的樣品在25分鐘內(nèi)濃縮至350μL;死體積設(shè)計確保樣品不會被離干而損失。依起始材料不同、起始體積不同,樣品可被濃縮50-200倍。低吸附豎向再生纖維素超濾膜及雙超濾柱設(shè)計,加快處理速度;反轉(zhuǎn)離心操作進(jìn)一步使寶貴的濃縮樣品回收率得以提高。這個產(chǎn)品替代傳統(tǒng)的透析、凍干、沉淀或攪拌式濃縮等技術(shù)和方法,是非常方便的工具。 特別推薦的應(yīng)用: 色譜洗脫產(chǎn)物的濃縮和脫鹽 單克隆抗體濃縮 培養(yǎng)上清中蛋白和***的濃縮 組織勻漿液和細(xì)胞裂解液澄清虹口區(qū)濃縮管銷售超濾濃縮管的各種系列應(yīng)用領(lǐng)域還是不一樣的。
特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn) 溫和的磁力攪拌避免發(fā)生聚集和剪切變性 所有型號都可以高壓滅菌 提供 3 種規(guī)格共選擇,用于濃縮 3mL - 400mL 及更大體積樣品 濃度達(dá) 10% 的溶液依然可以獲得高流速 應(yīng)用: 大分子(如蛋白、酶、抗體和***)溶液的濃縮和緩沖液置換 滲濾(Diafiltration)模式 非連續(xù)滲濾是換液的一種操作方法,即先濃縮到一定濃度再稀釋到起始的體積,并多次重復(fù)這個操作,直到溶液中的鹽或溶劑被 去除或降到需要的濃度。而連續(xù)滲濾(保持恒定體積)是將超濾杯經(jīng)轉(zhuǎn)換裝置(目錄號6003)與補(bǔ)液杯(目錄號6028)連接, 使供氣壓和液體流轉(zhuǎn)。連接有轉(zhuǎn)換裝置時,不必停下系統(tǒng)的運(yùn)轉(zhuǎn)就可以即時進(jìn)行濃縮和滲濾之間的切換,將兩種操作模式的優(yōu)點(diǎn) 集中在一起,有利于敏感的(蛋白)樣品在**恒定、溫和的條件下高效換液。
如果能確保用同樣的超濾管對其它蛋白成功操作的話,那么有可能是這個目的蛋白的原因。有時蛋白會因其本身的一些特性(構(gòu)象差異)而影響濃縮效果,建議選用上一分子量級別的超濾管(如原本選用30k,此時可以選擇10k)。 2)如果目的樣本也不在濾過液中,那么: a)蛋白樣本起始濃度是否大于25ug/mL? b)用來確定樣本濃度的方法是什么?是否可信? c)目的蛋白是不是沉淀了?如果是的,具體解決方法請參考上面的關(guān)于蛋白沉淀問題的解釋。超濾濃縮管的系列有很多。
7次低速離心,總耗時~100分鐘(含60分鐘孵育時間) 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂(50%懸濁液)和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h,其間可溫和攪動促進(jìn)結(jié)合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結(jié)合雜質(zhì)。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液,1,000×g離心1 min。 5. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(可選用50k MWCO型號)。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。4,000×g離心5 min。 7. 加入200μL 中和緩沖液。4,000×g離心15 min。 8. 加上**終需要的緩沖液1.5 mL。4,000×g離心15 min,置換緩沖液的同時進(jìn)行濃縮。 9. 倒轉(zhuǎn)Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管,1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。超濾濃縮管的優(yōu)勢您了解多少呢?虹口區(qū)濃縮管銷售
那么超濾濃縮管施工的優(yōu)勢都有哪些呢?江蘇Millipore超濾濃縮管批發(fā)
脫鹽/緩沖液置換并濃縮 5次低速離心,總耗時~35分鐘 1. 在上樣池中加入0.5 mL TBS-T預(yù)濕Amicon? Pro。1,000×g離心1 min。 2. 優(yōu)化選做:加入1.5 mL用于置換的緩沖液,1,000×g離心1 min。 3. 上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(有5種截留分子量規(guī)格可選)。 4. 加入1.5 mL樣品,4,000×g離心15 min進(jìn)行濃縮。 5. 加入1.5 mL需要置換的緩沖液,4,000×g離心15 min,換液的同時進(jìn)行濃縮。 6. 倒轉(zhuǎn)Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管,1,000×g離心回收處理好的蛋白。 * 進(jìn)行較大體積操作時,可以適當(dāng)延長離心時間,也可參考Amicon? Pro完整操作說明書 查看詳細(xì)信息。江蘇Millipore超濾濃縮管批發(fā)